1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.1研究意义1.1.1微生物修复土壤在经济不断发展的情况下,土壤重金属污染的问题也越来越严重,现在迫切需要一种高效便捷的方法对土壤进行修复。
利用微生物修复土壤污染具有效果好、成本低等优点,受到人们越来越多的关注。
重金属对环境及生态系统有长期的毒性而且容易在生物体内积累形成一系列毒害效应,通常情况下,受重金属胁迫后微生物会产生2个明显效应①不适应生长的微生物数量会减少或绝灭;②适应生长的微生物数量会增加或积累[1]。
2. 研究的基本内容和问题
1 研究目标 从重金属污染的区域土壤中筛选的3株对具有重金属抗性的芽孢杆菌,研究其在cd胁迫下的生长动力学过程和胞外聚合物含量变化,以期探索芽孢杆菌对重金属的抗性机制。
2 研究内容(1)cd胁迫下芽孢杆菌的生长曲线(2)cd胁迫下芽孢杆菌胞外聚合物主要成分测定3 拟解决的关键问题(1)处理芽孢杆菌的重金属cd的浓度梯度的设定以及重金属处理后芽孢杆菌培养时间的选定。
(2)芽孢杆菌胞外聚合物主要成分含量测定
3. 研究的方法与方案
1 研究方法(1)传统微生物培养方法对微生物进行扩大培养以及胁迫培养(2)乙醇沉淀法提取细菌胞外聚合物(3)16s rdna提取,鉴定菌种属2 技术路线↓ ↓↓ ↓3 实验方案3.1.1产多糖芽孢杆菌的筛选采集来自南京栖霞上矿区农田土样,称取 10 g土样加入90 ml去离子水,充分混匀后,80℃水浴30 min,置于摇床(160 r/min)上恒温(30℃)摇瓶培养。
吸取1 ml菌悬液进行系列梯度稀释涂布,稀释梯度为10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,吸取10-3,10-4,10-5,10-6梯度下菌悬液各200 μl,涂布于含有100 mg/l镉(cd)浓度的lb平板上,将平板置于30℃培养箱过夜培养。
根据培养基中菌落表面及形态,挑选六株菌在lb培养基上进行分离纯化后,挑选单菌落于有氮培养基上划线,隔夜培养后,选出生长较好的三株菌低温保存。
4. 研究创新点
特色或创新之处1芽孢杆菌对Cd的耐受性变化2 Cd胁迫下芽孢杆菌体胞外聚合物含量变化影响
5. 研究计划与进展
研究计划:2016.11-12:文献查阅,了解相关背景,确定研究方向学习相关实验技能;2017.01-03:研究Cd处理芽孢杆菌后细菌生长曲线2017.03-04:研究Cd处理芽孢杆菌后细菌胞外聚合物含量变化2017.5:整理实验数据,撰写毕业论文预期进展1 获得芽孢杆菌对Cd的吸附动力学过程2 Cd胁迫下芽孢杆菌后细菌胞外聚合物含量变化
