1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）1本课题研究意义 灵芝（ganoderma lucidum）是一种名贵的传统中药材，其子实体、孢子粉、菌丝体均可入药。
灵芝含有三萜类、多糖、甾醇、生物碱、氨基酸等多种化学成分，具有抗衰老、调节免疫、抗肿瘤、保肝、提高机体耐缺氧能力等活性，因此灵芝的药用价值开发是当今药用菌研究的一个前沿和热点。
灵芝三萜化合物与灵芝多糖是灵芝的主要药用成分。
2. 研究的基本内容和问题
1研究目标 利用ura3基因构建灵芝cas9基因组编辑体系。
2研究内容 采用高效基因编辑系统 crispr/cas9，构建灵芝基因 ura3敲除载体及转化体系。
通过分析基因 ura3 序列信息，选择高效的靶位点序列，同时导入两个载体，通过含有5foa的培养基进行目的菌株的筛选，再利用菌落 pcr 鉴定和测序来验证靶位点序列是否正确插入。
3. 研究的方法与方案
研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析1研究方法1.1基因敲除方法crispr/cas9基因编辑技术进行灵芝基因组编辑体系的构建。
构建含有ura3基因同源臂以及egfp的19-t质粒，使其与已有的cas9质粒一起转化灵芝原生质体，以便用pcr对转化子进行筛选。
1.2转化方法灵芝脂质体转化1.3筛选方法ura3基因可以编辑乳清苷-5-磷酸脱羧酶，若在培养基中加入5-foa（5-氟乳清酸），正常野生型细胞中的乳清苷-5-磷酸脱羧酶可将5-foa转化成有毒化合物，产物5-氟尿嘧啶能使细胞死亡。
4. 研究创新点
1.1利用ura3基因的特性进行筛选乳清酸核苷-5-单磷酸脱羧酶基因（ura3基因）是酵母v号染色体上的一个基因，该基因可以编码乳清苷5-磷酸脱羧酶，该酶失活，则细胞就无法生长，除非在加入尿苷或尿嘧啶的培养基中。
将ura3基因转化进营养缺陷菌株中，它们便可以正常生长（阳性选择）。
而若在培养基中加入5-foa（5-氟乳清酸），正常原养型细胞中的乳清苷5-磷酸脱羧酶可将5-foa转化成有毒化合物，产物5-氟尿嘧啶能够导致细胞死亡（阴性选择）。
5. 研究计划与进展
2016.09：基本实验技能练习，了解实验原理，初步设计实验。
2016.10：构建19-T质粒2016.11-2017.4：脂质体转化，筛选灵芝突变体，目的菌株的鉴定。
