1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1本课题研究意义1.1灵芝的重要价值灵芝(ganoderma lucidum)是著名的大型食药用真菌,具有丰富的营养和药用价值,在中国和东南亚国家有着悠久的应用历史。
灵芝在抗衰老、提高免疫、抗病毒和抗肿瘤等方面具有很好的疗效,其中灵芝三萜类化合物(灵芝酸)是灵芝的次级代谢产物,它含量的多少已成为评价灵芝质量的重要标准。
近年来随着灵芝基因组测序工作的完成,以及一系列遗传操作平台的建立,如rna干扰技术、基因过量表达体系等,有力地推动了灵芝成为一种新型模式药用真菌,显著提高了其科研和商业价值。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标、内容和拟解决的关键问题研究目标: 外源水杨酸处理条件下,skn7在灵芝三萜生物合成的调控机制的初步研究。
研究内容:1. 外源水杨酸处理条件下,skn7参与灵芝三萜的生物合成并检测野生型和skn7转化子灵芝三萜的变化。
2. 添加ros清除剂后,wt和skn7转化子的ros含量及ros相关酶的酶活变化并检测灵芝三萜含量的变化。
3. 研究的方法与方案
研究方法总三萜含量测定:(1)以灵芝三萜a为标准品绘制标准曲线。
(2)三萜测定:不同处理的菌丝置于28℃摇床培养7 d,去除培养基收集菌丝,置于60℃烘箱烘干至恒重,将其研磨成粉状待测。
样品制备:精密称取200 mg 60℃烘干菌丝粉,小心放入10 ml容量瓶中,加入95%乙醇定容,超声波破壁2 h,期间每20 min摇动一次,取8 ml 37℃静置过夜,60℃旋转蒸干,加入0.5 ml甲醇溶解,溶解液置于1.5 ml离心管中,离心后,使用一次性0.22 m有机相滤器过滤,通过uplc (ultra-performance liquid chromatography)检测。
4. 研究创新点
特色或创新之处首次报道了SA诱导灵芝三萜合成是通过ROS的影响,而SKN7参与ROS调控的过程,通过SA处理后,检测SKN7基因的表达量及其可能通过的某一信号影响灵芝三萜的合成,探索SKN7对灵芝三萜的生物合成的影响,将为次生代谢产物的调控机制的进一步完善提供初步证据。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展2016.12-2017.1SA处理WT后,SKN7基因的表达量的测定完成2017.1 -2017.3ROS及其相关的酶活测定完成2017.3-2017.4灵芝三萜的测定完成2017.4-2017.5整理数据,书写毕业论文
