1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1 芽孢杆菌的筛选
dna重组技术发明人之一，诺贝尔奖得主cohen教授，在dna重组技术发明之后曾开展过枯草杆菌的工作[1]，并对枯草杆菌表达系统的一些优点做过系统的阐述。
芽孢杆菌作为外源基因表达系统具有以下几个优点。第一，枯草杆菌是非致病的土壤微生物，在有氧条件下生长。其细胞壁组成简单，只含有肽聚糖和磷壁质，当分泌的蛋白跨过细胞膜后，就被加工和直接释放到培养基中。此外，芽抱杆菌分泌的蛋白质产品中不会混杂有类似革兰氏阴性菌细胞壁成分中的热源性脂多糖等物质，从而使得目的蛋白的纯化相对比较简单，而这一点是大肠杆菌无法比拟的。多数芽抱杆菌无致病性，美国食品和药物管理局（fda）已经将一些种类的芽抱杆菌列为原则上认为安全的微生物（gras）。第二，芽抱杆菌拥有一套高效的分泌信号肤及分子伴侣系统，赋予芽饱杆菌高效分泌目的蛋白的能力，而且在多数情况下，芽抱杆菌分泌的真核来源的重组蛋白质可以具有其天然构象和生物活性。第三，芽孢杆菌生长迅速、培养条件简单、遗传背景了解较为清晰。芽孢杆菌在科研和工农业生产领域被广泛应用，具有良好的发酵基础和生产技术，其在相对简单 的培养基中就能生长到很高的密度。
2. 研究的基本内容和问题
1 研究目标
本研究旨在从全国各地的土样和不同产地的牛奶样品中筛选出地衣芽孢杆菌；以及对枯草芽孢杆菌168进行胞外蛋白酶基因的敲除，减弱或者消除该菌种分解胞外蛋白酶的能力。
2 拟解决的关键问题
3. 研究的方法与方案
1 研究方法
1.1试验材料
枯草芽孢杆菌168菌株，由实验室保藏。
4. 研究创新点
选题较新颖，切合实际。本实验采取共转化的方法对胞外蛋白酶基因进行无痕敲除，无抗性基因残留，利于后续表达体系的构建操作。
选材合理。本实验所使用的菌种为实验室所保藏，材料易得。
5. 研究计划与进展
时间 研究计划及预期进展
2016.10-2016.11 查阅文献，总结实验已具备条件，设计实验
