1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
本课题研究意义：细胞自噬（autophagy）广泛存在于真核生物中，该过程通过对真核生物自身一些蛋白质、细胞器等成分的降解，对生物体生长发育、免疫防御、细胞程序性死亡、肿瘤抑制、预防神经退行性病变等方面有着非常重要的作用。
v-atpase作为一种广泛分布于真核细胞内的质子泵，通过对ph的调节影响细胞器中物质的分解。
酿酒酵母细胞内存在两种v-atpase，高尔基体和内体上v-atpase与液泡v-atpase。
2. 研究的基本内容和问题
课题研究目标：利用酵母双杂交技术对高尔基体和内体v-atpase的v0域亚基之一stv1与液泡v-atpase亚基vma6、vma9等之间的物理互作进行探讨。
最终确定这几个功能相关的蛋白质之间的互作关系。
研究内容：1） 在gfp-atg8标记酵母中构建stv1与液泡v-atpase亚基vma6、vma9的双敲除菌株；2） 通过荧光显微镜观察和蛋白印记实验来确认酵母内细胞自噬情况；3） 通过酵母双杂交检测stv1与vma6、vma9之间的互作情况。
3. 研究的方法与方案
研究方法：1）扩增片段用于敲除基因：利用pcr技术扩增含stv1两翼片段的抗性基因片段。
2）获得双敲除菌株：利用方法1中获得的序列，同源重组敲除野生型和液泡v-atpase亚基缺陷突变体（vam6Δ，vam9Δ）中的stv1，并进行诊断pcr验证。
3）细胞培养及荧光显微镜观察：将野生型、单敲菌株、双敲菌株经诱导自噬后用荧光显微镜观察荧光蛋白atg8在细胞内的分布，通过比较野生型、单敲菌株、双敲菌株中atg8的分布情况来判断stv1的缺失是否对液泡v-atpase亚基缺陷菌株细胞自噬缺陷程度产生影响。
4. 研究创新点
特色或创新之处：关于酿酒酵母中高尔基和内体上V-ATPase中的Stv1亚基与液泡V-ATPase亚基的互作，这一研究内容至今未见报道。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展：2016.3.1-2016.4.9：将Stv1从液泡V-ATPase亚基突变体中敲除；2016.4.10-2016.5.1：通过荧光显微镜、蛋白印记实验对相应突变体自噬情况进行观察探究；通过酵母双杂交实验对蛋白互作情况进行观察探究。
