1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
α-淀粉酶(e.c. 3.2.1.1)，系统名称为 α-1,4-葡萄糖-4-葡萄糖水解酶，是一种在葡萄糖生产、啤酒酿造、酒精工业、发酵以及纺织等许多行业中应用最为广泛的酶之一，使得α-淀粉酶的研究成为酶类研究中最活跃的领域之一。
虽然α-淀粉酶发现(1833年)至今己有将近200年的历史，但其结构与功能的关系至今并未完全阐明。
随着基因重组技术的发展，及工业中对α-淀粉酶的大量需求，使得α-淀粉酶的研究再次成为国内外学者研究的热点。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：1.筛选并得到淀粉酶生产菌2.获取淀粉酶合成的关键基因研究内容：通过鉴别培养基从红树林土壤中筛得生产淀粉酶的细菌，并通过克隆表达获得其中控制淀粉酶合成的关键基因拟解决的关键问题：1.从红树林土壤中筛得生产淀粉酶的细菌2.设计引物通过酶切获取目的基因
3. 研究的方法与方案
研究方法：1.通过涂布平板法获取目的菌株2.通过平板划线法对目的菌分离纯化3.通过pcr扩增目的基因4.构建表达载体并导入感受态细胞5.异源表达及酶学性质测定技术路线：实验方案：1. 获取目的菌株制备土壤悬液，通过涂布平板法与鉴别培养基获取目的菌株，即能产生淀粉酶的细菌2.获取目的基因 设计引物通过pcr获取目的基因3.pcr产物回收 根据dna片段纯化回收试剂盒操作说明回收片段。
4. 质粒dna的提取质粒提取采用北京bioteke生物技术有限公司的质粒快速提取试剂盒(plasmid dna purification kit)，具体步骤如下：将待提质粒的菌株接种于含相应抗生素的lb液体培养基中，37℃，180 rpm培养8 hr，取2 ml菌液至无菌洁净eppendorf管，12,000 rpm离心30 s，收集菌体；加入250 μl含有rna酶的溶液p1重悬菌体，加入250 μl溶液p2，温和颠倒混匀，加入400 μl溶液p3，混匀静置2 min；12,000 rpm离心10 min，收集上清至吸附柱，12,000 rpm离心1 min，弃滤液；加入500 μl去蛋白液pe，12,000 rpm离心1 min，弃滤液; 加入700 μl wash buffer，12，000 rpm离心1 min，弃滤液后空柱12,000 rpm离心1 min，将吸附柱转移至新的eppendorf管，加入30 μl 无菌ddh2o，12,000 rpm离心2 min 收集质粒，-20 ℃保存。
5.酶切与片段回收6.酶连将3 μl载体dna酶切回收片段转移到无菌pcr管中，加入5 μl pcr产物酶切回收片段。
4. 研究创新点
本课题筛选α-淀粉酶产生菌，克隆获得具有工业潜力的α-淀粉酶。
5. 研究计划与进展
2015年6月2015年7月查阅国内外相关的文献，设计实验方案，实验材料的收集，学习相关生物信息学软件；2015年7月2015年9月从红树林土壤中筛选能产生淀粉酶的细菌，并分离纯化保藏菌种；2015年9月2015年10月初步测定酶活及酶学性质；2015年12月2016年1月 通过PCR扩增目的基因；2016年3月2016年4月将目的基因连接至表达载体，大肠杆菌异源表达，测定酶活及酶学性质；2016年4月2016年5月 整理相关的实验结果与数据，撰写毕业论文。
