1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题意义:进一步完善了田菁根瘤菌抗ros的机理解释了ohrr基因除了调节ohr基因抗有机过氧化物的作用,还与其他基因互作,使田菁根瘤菌抗ros的作用(如h202等)。
国内外研究概况:根瘤菌是一种在豆科植物宿主根部结瘤的固氮菌,在结瘤过程中,根瘤菌必须耐受由宿主产生的氧自由基。
在草木樨中华根瘤菌属中深入的研究表明,其能抵抗h202和超氧化物,而该菌属中ohr基因和其调控基因ohrr对有机过氧化物有耐受作用。
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2. 研究的基本内容和问题
研究的目标:筛选在田菁根瘤菌中与ohrR互作的抗ROS的基因内容:1.田菁根瘤菌ohrR基因缺失株经转座子突变后筛选2.抗ROS突变株的筛选3.目标基因的测序验证拟解决的关键问题:抗ROS突变株的筛选
3. 研究的方法与方案
研究方法:a.转座子突变技术b.抗性基因筛选技术实验方案:1.ohrR基因突敲除株的获取(实验室提供)2.供受体菌株接合,构建转座子突变菌株3.利用抗性基因筛选经转座子突变成功的菌株4.6mM H202筛选突变株5.提取抗H202突变株的总DNA6.总DNA经随意引物PCR扩增并电泳检验7.条带符合的PCR产物由测序公司测序8.测序结果网上比对,查看其与OhrR基因的关联性 可行性分析:本项目技术成熟,实验设计严谨。
本实验室近年来从事研究工作所积累的宝贵经验和成就使得本项目具有可行性。
4. 研究创新点
文献报导草木樨中华根瘤菌抗有机过氧化物的作用是通过OhrR基因调节Ohr基因来实现的,本实验在该实验室以有实验背景的前提下,筛选OhrR基因抗ROS的互作基因。
进一步探究该基因的能。
5. 研究计划与进展
9月-10月 完成一次实验方案10月-12月 重复实验方案,筛选目标基因1月-3月结果数据分析,论文攥写
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