1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
一、 本课题意义及前景细菌可以根据胞外各种不同的小分子化合物感知外界环境的变化并调整胞内的信号通路对相应生理行为进行调整和变化,通过这种胞内胞外独特的信号传导,低等生物实现了与其他生物间的相互作用。
在细菌胞外信号分子调节系统中群体感应的调节尤为重要。
群体感应(quorum sensing)(dunny gm and winans sc 1999, fuqua, c., s. c. winans, and e. p. greenberg1996, fuqua wc, winans sc, greenberg ep 1994)是细菌根据细胞密度变化进行基因表达调控的一种生理行为,具有群体感应的细菌能产生并释放一种被称为自体诱导物(autoinducer,ai)(c.m.waterset al 2005)的信号分子,它可以被多种生物群落感知,并随着细胞密度增加而同步增加,当自体诱导物积累到一定浓度时会改变细菌特定基因的表达。
2. 研究的基本内容和问题
一、研究目标在土壤环境条件下,研究抗生素对菜豆根瘤菌及其他根瘤菌的杀伤情况,从而为在土壤环境条件中筛选受该环境因素调控表达的基因做准备。
二、研究内容研究在体外纯培养条件下和土壤环境条件下,经抗生素的处理,菜豆根瘤菌及其他根瘤菌的存活率。
三、拟解决的关键问题① 确定在体外纯培养条件和土壤环境条件下能达到较好杀菌效率的抗生素浓度,以及杀菌时间。
3. 研究的方法与方案
一、研究方法① 在cy液体中,研究km、gm的杀菌效果。
(体外纯培养)菌液培养至od600为0.2,然后分装1ml/管,向其中加入相应浓度的抗生素,28℃培养,1h、2h、5h取样,取100μl菌液出来进行梯度稀释,然后点板于cy空白板上,28℃培养后进行菌落计数。
② 采集土壤,将土壤分装入一次性杯子中,随后按照106/g土将菌液混进土中。
4. 研究创新点
目前研究对于根瘤菌在实验室培养条件已有一定的了解,但对于根瘤菌在土壤中相关基因受群体感应的表达情况了解不多。
本实验研究了在体外培养条件和土壤环境条件下抗生素的杀菌效果,为在土壤环境条件中筛选受该环境因素调控表达的基因做准备。
5. 研究计划与进展
⑴ 2014年9月-2014年10月:相关文献查阅、及方法学习摸索,试验条件的准备,学习相关实验操作;⑵ 2014年10月-2015年1月:预实验及相关条件的摸索;⑶ 2015年 3月-2015年 4月:综合实验数据进行分析;⑷ 2015年4月 -2015年5月:数据分析,完成论文写作。
