激发子PsXEG1蛋白原核表达的摸索开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

大豆疫霉(phytophthora sojae)引起的大豆根茎腐病是威胁全世界大豆生产的毁灭性病害之一[1][2]，每年导致全世界10-20亿美元的损失[3]。

研究大豆疫霉在侵染大豆过程中效应分子如何激发或抑制植物免疫反应对于揭示病原菌的侵染机制非常重要[4]。

基因对基因假说认为植物中许多抗性基因(r)编码的蛋白直接或间接地识别了相对应的无毒基因(avr)编码的效应蛋白,启动级联信号传递链,激活防卫基因的表达,最终表现出对病原菌的抗性(flor, 1947)。

2. 研究的基本内容和问题

目标：获得大量可溶性的psxeg1蛋白。

内容：本研究中的psxeg1是一个新发现的疫霉菌病原相关模式分子。本实验构建psxeg1的pet28a原核表达载体，利用大肠杆菌原核表达。将上清液和沉淀蛋白分别进行western blot蛋白电泳分析，并将上清液注射烟草分析结果。

3. 研究的方法与方案

研究方法：

一、提取pet28a质粒

质粒提取的方法采用宝生物公司（大连）takara minibest plasmid purification kit ver.3.0 试剂盒提取。具体步骤如下：

4. 研究创新点

特色：通过异源表达证实此蛋白在不同表达系统中，如细菌中，都可以表达出激发活性的蛋白。

创新之处：目前，卵菌中激发子的研究相对滞后，本研究中的PsXEG1是一个新发现的大豆疫霉菌激发子。本实验首次通过原核表达的方法，对该激发子在大豆疫霉菌与大豆的相互作用进行分析。

5. 研究计划与进展

2014.9-10 阅读文献，参考资料，熟悉课题内容。

2014.10-11 构建psxeg1的pet28a载体，并将载体转入大肠杆菌dl21。

2014.11 psxeg1蛋白原核表达分析，western blot电泳分析。