1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
国内外对菜豆根瘤菌cinR基因对其氨基酸运输的影响并未做出确定性研究,但类似的研究已经进行多项并且相关的研究方法已经建立。
Tao Cai, Wentong Cai, Jiang Zhang, et alHost legume-exuded antimetabolites optimize thesymbiotic rhizosphere. Molecular Microbiology 2009, 73(3):507-17.Giblin, L., B. Boesten, S. Turk, P. Hooykaas, and F. OGara. 1995. Signal transduction in the Rhizobium meliloti dicarboxylic acid transport system. FEMS Microbiol. Lett. 126:2530.Murphy, P. J., N. Heycke, S. P. Trenz, P. Ratet, F. J. de Bruijn, and J. Schell. 1988. Synthesis of an opine-like compound, a rhizopine, in alfalfa nodules is symbiotically regulated. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:91339137.汪洋,郑会明,杨梦华,等,中华根瘤菌自体诱导物合成酶基因的筛选及其在大肠杆菌中的表达.微生物学报,47(5):838一542.
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:确定cinr基因所影响的是何种氨基酸的运输,并确定这种影响与菜豆根瘤菌种群密度的关系。
研究内容:通过敲除掉cinr基因,然后和野生菌进行不同浓度稀释的对照培养(所用培养基为某单种氨基酸为唯一氮源的培养基),通过多菌落生长情况观察得出结论。
关键问题:1、对菜豆根瘤菌的cinr基因进行敲除,所采用的方法为双交换法 2、通过蓝白班筛选发和pcr配合凝胶电泳法筛选出cinr基因缺失菌株 3、把菌株进行不同浓度稀释培养,必须严格无菌操作。
3. 研究的方法与方案
研究过程和技术步骤:首先用双交换法敲除相关基因,然后和对应野生菌进行对照培养。
是实验常用的对照原则,并重复实验以求得到准确的结果排除偶然性 步骤:菜豆根瘤的培养 根瘤的提取 菌的培养与活化 双交换法对基因的敲除 突变菌株的检测与野生菌的对比培养 菌落的计数与数据分析 可行性:运用传统的方法进行该课题的研究有着成熟的试验方法和稳定的技术支持
4. 研究创新点
用传统的细菌培养法和对照、重复原则结合新的基因敲出发和现代化仪器来达到实验的目的。
5. 研究计划与进展
进度安排: ⑴ 2014年1月19日-2014年2月28日:相关文献查阅、及方法学习摸索,试验条件的准备,学习相关实验操作; ⑵ 2014年3月1日-2014年4月14日:预实验及相关条件的摸索; ⑶ 2014年4月15日-2014年5月9日:综合实验数据进行分析; ⑷ 2014年5月10日-2014年5月19日:数据分析,完成论文写作。
