1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
本课题的意义
在自然界中，除了动物和植物，还分布着许多体积微小、种类繁多的生物，称为微生物，包括细菌、真菌、放线菌和病毒等。微生物对外界环境的适应能力很强，可以在更加复杂和特殊的环境中生长[1]，它对环境的适应性主要是通过其复杂的信号转导途径来实现的。双组分系统是微生物的主要调控系统之一[2]，广泛存在于细菌中，一般由组氨酸激酶和反应调控蛋白组成。细菌通过组氨酸激酶感知外界信号并调控相应的信号转导，再由反应调控蛋白对感受到的信号做出细胞反应，由此应对外界刺激和环境变化。双组份系统在细菌的调控系统中具有中心地位[3]。
本课题中的组氨酸激酶（10875）属于cpx双组份系统中的组氨酸激酶cpxa。cpx双组份调控系统是革兰氏阴性菌中普遍存在的一类双组份系统。ph、盐离子浓度、蛋白的错误折叠等细胞周围环境的变化都有可能激活cpx系统[4]，它的主要功能是感受细胞膜压力变化，有选择的激活下游基因转录，从而应对这些外界因素，实现对细菌生命活动的精细调节。cpxa镶嵌在细胞内膜上，通过hamp连接区将位于细胞周质的信号输入区和位于细胞质的自身激酶区相连。n端信号输入区可以感知外界环境的变化，c端自身激酶区由组氨酸（his）磷酸化位点和催化区组成，它作为激酶核心，有激酶和磷酸酶两种活性[5]。cpxa是细菌感受外界环境信号所必需的，在cpx双组份系统中尤为重要。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标
将沙雷氏菌fs14中组氨酸激酶10875全长及其膜外部分克隆至目标受体菌并诱导其表达，并对表达蛋白进行纯化。
研究内容
3. 研究的方法与方案
研究方法
设计引物和pcr技术扩增目的基因；
用限制性内切酶和连接酶进行片段与载体的酶切和连接；
4. 研究创新点
在实验技术上，本实验涉及微生物学、分子生物学等学科知识，充分体现了交叉学科的研究特点；在实验方案上，本实验选取粘性沙雷氏菌中组氨酸激酶的全长及其膜外部分为实验对象，对其进行诱导表达及纯化，为进一步探究组氨酸激酶在沙雷氏菌中的功能基础奠定基础。
5. 研究计划与进展
2019.09-2019.10 查阅资料和文献，学习和熟悉基本实验操作，设计引物；
2019.10-2019.11 组氨酸激酶10875全长及膜外部分目的基因表达质粒的构建
2019.11-2019.12 组氨酸激酶10875全长及膜外部分目的蛋白的表达检测及纯化
