大肠杆菌自诱导表达谷氨酸脱羧酶发酵条件的优化开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，简称gaba)是一种天然存在的、非蛋白质氨基酸。

gaba的存在范围很广，许多植物以及微生物中都能提取到，但含量很低。

它的制备方法和应用价值受到人们的关注与重视。

2. 研究的基本内容和问题

目标：以zym-5052培养基为基础研究出最适合该重组大肠杆菌高效诱导表达gad的条件。

内容：培养基的优化、培养条件的优化。

拟解决的问题：1. 找出诱导培养基组成中最合适的c源及其浓度、n源及其浓度、无机盐及其浓度、诱导剂浓度、生物素浓度、麸皮浓度等因子。

3. 研究的方法与方案

研究方法：先做单因素实验，做完后如果时间允许，用响应面分析法分析，再验证最佳条件。

技术路线：gaba粗产品的制备：发酵液的制备离心与底物一定条件下反应沸水浴终止反应离心得上清粗gaba产品。

gaba的测量：比色法（粗测）：gaba粗产品 一定量四硼酸钠缓冲液 6%苯酚 次氯酸钠混匀沸水浴冰浴od630测量。

4. 研究创新点

传统的诱导表达方法使用IPTG,而本实验以乳糖诱导重组大肠杆菌种T7表达系统表达产生目标蛋白。

乳糖成本比传统诱导剂IPTG价格低，可以直接在初始培养基中按一定量直接加入，减少生产工序，而且没有毒性作用，为工业化生产提供一定参考。

5. 研究计划与进展

3月4月优化好培养基成分。

4月5月优化好发酵条件。

5月6月完成论文。