1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
禽流感(avianhifluenza,al)是由禽流感病毒(avianhifluenzavirus,aiv)引起的多种动物易感传染病,不仅在禽类、猪等动物间发生传染,其中h5n1、h7n7、h9n2等亚型禽流感病毒会发生感染人的现象。
是危害世界养禽业的重要传染病之一,社会上爆发流感传染病的历史中也有很多是由于禽流感病毒感染的[1]。
而且禽流感病毒突变几率高,对疫苗研发是一种阻碍,因此更深入的了解流感病毒宿主限制的生物学和遗传学基础,是确定一种新的流感病毒能否在人类之间暴发流行的关键。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标本次试验通过研究h9n2亚型禽流感病毒片段神经氨酸酶(na)的提取,作用在小鼠树突状细胞,观察其对小鼠树突状细胞mirna的影响。
若该片段对树突状细胞的影响大,证明na是对免疫系统有着重要作用的一个禽流感病毒片段。
对今后流感病毒疫苗的研制和的人体免疫系统的提升有着重要影响。
3. 研究的方法与方案
研究方法及技术路线小鼠骨髓树突状细胞体外诱导培养目的基因载体的构建转染小鼠骨髓树突状细胞观察并检测对树突状细胞的影响实验方案 1、小鼠骨髓来源树突状细胞体外诱导培养及鉴定(1)颈椎脱位法处死c57bl/6小鼠,无菌状态下取股骨和胫骨,浸泡在rpmi-1640培养基中。
(2)用1ml注射器吸取rpmi-1640培养液,从骨干的一端刺入骨髓腔,将骨髓冲洗到一无菌培养皿中,每根骨头反复4~6遍,收集培养皿中的骨髓细胞悬液,离心,1500 rpm10 min。
(3) 弃去上清,加入5 ml无菌tris-nh4cl溶液悬浮细胞溶解红细胞,于室温下静置2分钟溶解红细胞后,再次离心,1500 rpm5 min,弃上清。
4. 研究创新点
在之前的实验中已经有人研究过H7N9亚型禽流感病毒对小鼠树突状细胞miRNA的影响,本实验是进一步深入探究,是流感病毒RNA中哪一个片段对树突状细胞miRNA有影响,以及是怎样的影响。
5. 研究计划与进展
3月到4月构建表达载体,并且在4月进行细胞培养。
5月中上旬病毒和质粒导入受体细胞,测定其具体形态学变化定性定量进行分析其化学性质的变化5月中下旬:实验收尾总觉并进行论文的撰写
