青枯病拮抗菌的筛选及其抗胁迫性的初步探索开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义：青枯病是一种严重危害农作物以及水果蔬菜品质和产量的土传性病害。

病菌在土壤中越冬，随灌溉水及土壤传播，严重时给农业生产带来严重的损失。

以农药为主的防治措施，不仅严重破坏土壤生态结构，而且对人们的身体健康和环境构成了极大危害，与施用化学农药带来的环境污染和农药残留问题相比，生物防治方法具有安全、经济、高效等优势。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：青枯病是全球主要农业病害之一，严重影响全球农业发展。

筛选拮抗菌，为生物防治提供新的选择。

研究内容：拮抗菌的分离和筛选；菌种测序；抗性检测；抗胁迫性探索；拮抗机制探索等。

3. 研究的方法与方案

研究方法：高盐法提取基因组dna菌株30℃、180rpm培养至od600≈2.0步骤：1、取1.5ml菌液于1.5ml/2ml离心管内，12000g离心1min收集菌体；2、用1.0ml ten重悬菌体，12000g离心1min收集菌体，加入1.0ml ten悬浮菌体；可选：如果菌株不容易破壁（如一些革兰氏阳性菌），需要加入溶菌酶（溶菌酶现配现用）。

加入10μl溶菌酶，35℃水浴2h或过夜。

3、加入100μl 10% sds和10μl蛋白酶k(20mg/ml) （颠倒混匀），55℃水浴，直至管内液体澄清透明时，则裂解完全。

4. 研究创新点

1、使用BIOLOG对拮抗菌的碳源利用情况进行分析。

2、从分子层面初步探索拮抗机制。

5. 研究计划与进展

2013.10.012013.11.01 查阅相关文献，确定实验方案，熟悉实验室各种技能。

2013.11.012014.02.01 筛选拮抗菌。

2014.03.012014.04.01 拮抗菌的碳源利用以及抗胁迫性实验。