沙雷氏菌Marc超家族蛋白的克隆纯化开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.1粘质沙雷氏菌粘质沙雷氏菌(serratia marcescens ) 又称灵杆菌，能产生灵菌红素，为肠杆菌科沙雷属革兰氏阴性细菌。

粘质沙雷氏菌广泛分布于水体、土壤等环境，也是正常存在于人体中的最小细菌, 泌尿道和呼吸道是人体重要的贮菌部位，儿童的胃肠道也可贮菌。

其曾一度被认为是无害的环境污染菌。

2. 研究的基本内容和问题

本实验对L085_03265、L085_15230和L085_17925异源表达进行研究，通过载体选择，片段连接，质粒转化，诱导表达检测，观察基因是否表达，若表达对表达蛋白进行纯化，并优化表达效果。

本实验的关键在于载体的选择和表达条件的筛选。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法1.1实验材料serratia fs14，大肠杆菌dh5α，大肠杆菌c43（de3），pet系列载体，iptg，dna回收试剂盒，相关酶和buffer。

1.2实验方法1.2.1片段扩增使用primer设计引物送公司合成，以serratia fs14总dna为模板进行pcr并回收。

1.2.2载体用碱裂解法提取质粒载体，酶切相应位点，获得所需载体。

4. 研究创新点

目前国内外关于marC超家族的结构和功能研究较少。

异源表达来控制蛋白的表达量以适应后续研究的蛋白需求。

5. 研究计划与进展

研究计划2015.3.2-2015.3.4片段PCR，载体回收2015.3.5-2015.3.7片段载体连接检测2015.3.8-2015.3.10 蛋白表达检测2015.3.11-2015.3.13 蛋白小量纯化2015.3.14-2015.4.30 更换载体，进行重复