1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1 本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等1.1 课题的研究意义多菌灵(methyl 1h-benzimidazol-2-yl,carbendazim 或mbc),化学名称为苯并咪唑-2-氨基甲酸甲酯,结构式为:多菌灵是农业生产中常用的广谱、内吸性杀菌剂,广泛应用于植物、瓜果、蔬菜等植物的病害防治,如豆类的炭疽病、白粉病、疫病,茄子黄萎病,大葱的灰霉病,黄瓜的菌核病,蔬菜苗期的立枯病等[1]。
此外,还用于水果保鲜以及工业中的防霉等。
在南方主要用于防治水稻、蔬菜类的病害,而在北方主要用于防治小麦、棉花、蔬菜类的由真菌引起的病害。
2. 研究的基本内容和问题
2 研究方案2.1 研究目标:从长期被多菌灵污染的土壤中分离出一株多菌灵高效降解菌株,根据菌株的生理生化特征并结合16s rrna基因相似性序列比对,鉴定其系统发育地位。
根据不同情况下降解多菌灵的效果,研究其降解特性,并进一步推断其代谢产物和降解途径。
2.2 研究内容:从长期施用多菌灵的土壤中富集培养,涂布于lb培养基进行纯化,挑取单菌落扩大培养,分离纯化出多菌灵降解菌株。
3. 研究的方法与方案
3 研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析3.1 研究方法及实验方案3.1.1 降解菌株的分离取长期施用多菌灵的土壤5.0g,于多菌灵浓度为50 mg/l的无机盐液体培养基中进行驯化,富集培养并传代,将传代后的富集培养液以10-3~10-8稀释涂布在含有以100 mg/l多菌灵为唯一碳源的固体无机盐培养基平板上,30℃培养2~3天,挑取平板上的单菌落于lb液体培养基中培养,将培养液离心洗涤后作为种子液,在无机盐培养基中测定其降解效果。
3.1.2 降解菌的鉴定形态学鉴定。
挑取菌株在lb固体培养基上划线,30℃培养7d,观察菌落的形态特征。
4. 研究创新点
主要集中在通过筛选高效降解菌株,并对其生物学特性进行研究,确定最佳降解条件,以达到丰富多菌灵降解菌资源的目的。
对于菌株的降解机理及降解酶基因的克隆等,在分子方面上做了一部分的研究。
5. 研究计划与进展
5 研究计划及预期进展5.1 研究计划:(1)2014.08-2014.10查阅资料,整理思路,准备实验材料;(2)2014.10-2014.11学习并掌握无菌操作等基本实验技能,掌握实验的大致流程;(3)2014.11-2015.03分离纯化降解菌株,进行相关的生理生化实验、克隆降解酶基因并同时进行数据的收集和整理;(4)2015.03-2015.04处理分析实验数据,撰写毕业论文。
5.2 预期进展:(1)分离纯化得到一株降解菌株并对其进行生理生化实验;(2)克隆降解酶基因,初步分析菌株的降解途径;(3)学习并掌握实验操作基本技能和相关仪器的使用。
