1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
（1）本课题的意义近年来，致病菌耐药性的增加和扩散已成为全世界关注的热点问题，而人类医疗和畜禽养殖业抗生素的滥用正不断加剧这一问题。
众多研究表明土壤环境作为一个巨大的抗性基因储存库[1-2]，在抗性基因的传播中起到重要作用，而近年来畜禽粪便作为有机肥在土壤中的施用也对抗性基因在土壤中的富集在传递造成了潜在的风险。
四环素作为其中一种代表性抗生素，经常用于饲养业，且其大部分会随动物粪便排出体外[3]。
2. 研究的基本内容和问题
（1）研究目标四环素是一类常见的抗生素，除广泛用于医疗外，还作为兽药和促生长剂大量用于养殖业。
本实验结果证明养殖场周围土壤是抗性基因的一个重要存储库，为抗性基因进入食物链提供一个可能的来源，同时建立定量检测四环素抗性基因的方法，可为今后进一步系统研究土壤中抗生素抗性基因的环境行为提供基础。
（2）研究内容2.1土壤采集对南京周边大型养殖场及垃圾填埋场共三个地点进行采样，样品采集深度为0~10cm，每个样点采取1kg。
3. 研究的方法与方案
（1）研究方法 1.1试剂盒提取土壤dnafastdna spin kit for soil试剂盒提取1.添加0.25g干土（0.5g鲜土）到 lysing matrix e tube，加入978ul sodium phosphate buffer；2.加入122ul mt buffer，在fastprep仪器中混匀40秒（速度6.0），140000r离心 lysing matrix e tube 10min，转移上清液到一个2ml的干净的管；3.加入250ulpps试剂混合，用手摇动10次，14000r离心5min；4.将上清液移至一个干净的2ml管，上清液加入1ml binding matrix suspension（binding matrix 再用前需重悬均匀），旋转器反转2min，让dna结合基质。
管架上静止3min，让硅胶基质沉淀。
（移除腐殖酸14000r瞬离）；5.小心去除500ul上清液，避免碰到沉淀的binding matrix。
4. 研究创新点
1. 以有机肥长期施用土壤作为研究对象，系统分析其中四环素抗性基因的种类和丰度；2. 使用荧光定量PCR技术对土壤中四环素等抗性基因丰度进行定性和定量分析。
5. 研究计划与进展
2013.11.012013.12.15 查阅相关文献，确定实验方案，熟悉实验室各种技能2013.12.162014.03.15 筛选土壤中的抗性基因2014.03.162014.04.30 对抗性基因定量分析2014.05.01结题前统计实验数据，撰写毕业论文
