1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.1课题意义
运体是细胞膜上的重要蛋白,介导了细胞对离子的吸收和释放,具有非常重要的生理功能,诸如,营养元素的吸收和转运,调节气孔运动,调节细胞渗透势等(schroederetal.,2013)。而离子通道的功能及其调控机制研究也日益成为植物生理学和分子生物学研究领域的热门课题。
1.2国内外研究概况
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2. 研究的基本内容和问题
2.1研究内容
(1)利用同源重组的方法构建cngc10的酵母双杂交bait载体。
(2)利用同源重组的方法构建cpk3、4、6、11、21、23、32的酵母双杂交pray载体。
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3. 研究的方法与方案
3.1研究方法:
(1)载体构建。pcr克隆cngc10和cdpks的编码序列,用限制性内切酶处理bait或pray载体,转入酵母菌株ap4或ap5中进行同源重组,然后提取酵母质粒回转大肠杆菌测序鉴定。
(2)酵母双杂交。将构建好的载体共转化进入酵母菌株nmy51,于二缺培养基上筛选阳性转化子,每种组合各挑取10个阳性转化子单克隆划线到四缺培养基上,检测生长状况并进行x-gal显色反应
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4. 研究创新点
CNGC10的通道调控机制目前还没有明确的报道,而且其离子通道活性也没有明确鉴定,因此本研究具备明显的创新性。
5. 研究计划与进展
2016年3月:
构建cngc10和cdpks进行酵母双杂交所需要的载体。
2016年4月至2016年5月:
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