1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
生化实验结果表明，棉花在遭受黄萎病病原菌侵染后，在其内部迅速形成物理屏障或生化屏障或二者同时发生的反应来表现其抗性。
棉花植株在黄萎病菌侵袭后首先表现的保护性反应是表皮的木质化和内部组织的木栓化。
在一定程度上，这种反应可限制病原菌的入侵速度,但不能彻底阻断病原菌的侵染。
2. 研究的基本内容和问题
利用vigs技术，通过农杆菌介导的瞬时转化方法沉默lrr类基因，观察结果是否会发生改变棉花对黄萎病的抗性的情况。
若沉默棉花中lrr类基因，会明显降低棉株对黄萎病的抗性，表明这些基因在棉花抗黄萎病中具有重要的作用。
本实验主要解决的关键问题是熟悉掌握vigs技术的原理和内容，掌握基因沉默技术的精髓，以及棉花的栽培培育及筛选。
3. 研究的方法与方案
棉花中rna提取反转录cdnapcr克隆lrr连接trv2载体转入农杆菌gv3101注射到棉花，使棉花中lrr基因沉默接黄萎病菌vd8病情调查统计（发病情况） vigs技术1、 构建目的基因的vigs载体设引物，扩增目的基因中大小约400500bp的片段，酶切产物亚克隆至经同样酶切的trv2基因沉默载体，获取重组质粒，经酶切、得到大小约400500bp的产物，与预计大小吻合，证明这些片段已经成功连接到trv2载体上。
trv1和含有目的基因片段的trv2分别转化农杆菌gv3101，随后，采用pcr进一步验证三个基因沉默载体中插入片段的正确性。
挑取trv2mapk转化农杆菌gv3101的单菌落，用通用引物对菌液进行pcr扩增，扩增产物大小与预计大小一致，证明这些菌落含有目的基因片段，将菌液于70℃保存。
4. 研究创新点
目前关于抗病基因的研究主要集中在拟南芥、水稻、番茄和小麦等植物上，而棉花中克隆主效抗病基因的报道还相对较少。
国内外关于抗黄萎病的研究在茄科植物中研究较为深入，kawchuk等从番茄中发现ve1和ve2两个抗黄萎病基因，它们通过结合不同的信号分子促使酪氨酸磷酸化，编码细胞表面的类受体激酶蛋白由信号肽、跨膜结构域、lrrs重复区、n-端成熟区和c-端胞内短肽组成。
fradin等运用遗传转化的方法把ve1转入拟南芥中，并证明转基因拟南芥增强了对黄萎病的抗性。
5. 研究计划与进展
棉花中RNA提取反转录cDNA（2016.12016.2）PCR克隆LRR连接TRV2载体转入农杆菌GV3101（2016.32016.4）注射到棉花，使棉花中LRR基因沉默接黄萎病菌VD8病情调查统计（发病情况）（2016.42016.5）
