利用CRISPR系统构建灵芝基因敲除载体开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义

利用crispr系统建立灵芝基因敲除体系。该体系不仅在研究灵芝基因功能方面具有应用前景，同时也为今后进一步培育灵芝三萜高产菌株奠定基础。此外，该技术的成功应用为进一步揭示灵芝三萜生物合成的调控机制积累了资料，具有十分重要理论意义。

灵芝的研究意义

2. 研究的基本内容和问题

1. 研究目标

构建用于灵芝基因敲除的crispr载体，导入灵芝，利用该载体敲除ura3基因。

2．研究内容

3. 研究的方法与方案

1．研究方法

基因克隆：PCR技术，感受态制备，热激法，转化。

2．技术路线

可行性分析

在本实验室（真菌实验室）灵芝研究中已经积累了丰富的经验，实验技术、方法成熟。实验室成功建立了基因的沉默技术及过表达技术，这些遗传操作手段为下一步研究基因的功能提供优良的前提。本项目的研究计划已经划分，步骤详细切实可行，工作量适中，可以在一年内完成课题，并完成结题报告。

4. 研究创新点

本实验首次在灵芝这类大型丝状真菌中研究，现有的利用CRISPR技术的研究在动物、植物中涉及较多，而大型真菌中研究较少，本项目以灵芝为材料，利用CRISPR系统建立灵芝基因敲除体系。

5. 研究计划与进展

1.研究计划

2015.9-2015.11 克隆u6启动子

2016.4-2016.5 构建载体，倒入灵芝，验证。