酶蛋白包涵体复性新方法的研究开题报告

 2021-08-08 12:08

全文总字数:689字

1. 研究目的与意义

酶的大规模生产主要采用基因工程菌进行发酵培养,但重组蛋白在大肠杆菌中异源表达时,相比可溶性表达,目的蛋白更多地以包涵体的形式聚集在细胞内。

包涵体复性常规方法是使用高浓度变性剂使包涵体变性后,再采用稀释或色谱法进行复性,该方法变性剂和缓冲液消耗量大、时间长、能耗大、复性率低。

本研究以绿色的深共熔溶剂 (Deep eutectic solvents, DESs) 为溶剂,研究DESs在包涵体复性中的新应用,有望实现无变性剂复性,减少环境污染,简化复性工艺,提高复性率。

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2. 国内外研究现状分析

目前,已报道的包涵体高效复性的方法,大多需要使用大量的复性液、复性成功率低、难以实现大规模工业化生产。

深共熔溶剂具有廉价、低毒、可生物降解等特点,是目前在工业界和学术界备受关注的一种溶剂,在分离提取、化学反应、 环境保护、材料科学等领域都有相应应用。

但是,还未有指出关于DES对包涵体的复性的文献报道。

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3. 研究的基本内容与计划

研究内容:不同DESs的制备以及对包涵体的溶解效果,对DESs的溶解条件进行优化, DESs溶解包涵体复性方式的研究。

研究计划:12月31日之前,DESs的制备、初筛和调制;3月20日之前,DESs的复性方法及优化;4月20日之前,包涵体在DESs中的稳定性以及DESs的复用率的研究;6月1日之前,论文撰写、定稿。

4. 研究创新点

首次尝试将DESs应用于包涵体的溶解。

通过建立一个工艺简单、复性率高的复性方法,解决工业上重组菌大量产包涵体且包涵体利用率低的问题;扩宽了DESs应用领域,增加了其工业应用价值。

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