特立帕肽纯化方法开发开题报告

1. 研究目的与意义

骨质疏松是一个世界范围的健康问题，目前全球发病率已超过25%，其发病率已跃居常见病、多发病的第7位。随着对骨质疏松症发病机制、病理学特征等进一步认识，治疗药物的研究也不断深入。临床治疗骨质疏松症的药物可分为促进骨形成药物如甲状旁腺激素、他汀类等，抑制骨吸收药物如雌激素、选择性雌激素受体调节剂、双膦酸盐类、狄诺塞麦等，既能抑制骨吸收又能促进骨形成的药物如锶盐，钙剂和维生素d及衍生物以及中医药等。我国是世界上老年人口最多的国家，现有骨质疏松患者9000万，占总人口的7.1%，预计到2050年将增加到2.21亿，那时世界上一半以上的骨质疏松性骨折将发生在亚洲，绝大部分在我国，所以研究骨质疏松症的预防和治疗对人类的身体健康和生活质量具有重大意义。

特立帕肽是一种合成的34肽，为人甲状旁腺素pth的1-34氨基酸片段，氨基酸顺序如下：h-ser¹-val²-ser³-glu⁴-ile⁵-gln⁶-leu⁷-met⁸-his⁹-asn¹⁰-leu¹¹-gly¹²-lys¹³-his¹⁴-leu¹⁵-asn¹⁶-ser¹⁷-met¹⁸-glu¹⁹-arg²⁰-val²¹-glu²²-trp²³-leu²⁴-arg²⁵-lys²⁶-lys²⁷-leu²⁸-gln²⁹-asp³⁰-val³¹-his³²-asn³³-phe³⁴-oh。该片段是含有84个氨基酸的内源性甲状旁腺素pth具有生物活性的n-末端区域。本品的免疫学和生物学特性与内源性甲状旁腺素pth以及牛甲状旁腺素pth(bpth)完全相同。

特立帕肽(teriparatide)作为一种促进骨形成的多肽药物，分子式：c₁₈₁h₂₉₁n₅₅o⁵¹s₂.c₂h₄o_{2，英文名称：teriparatide acetate，}经过多年临床研究证实对各类骨质疏松症有较好的疗效,可与大多数抗骨吸收药物联用并呈现协同作用。本药[hpth(1-34)]是一种合成的多肽激素，为人甲状旁腺素pth的1-34氨基酸片段，该片段是含有84个氨基酸的内源性甲状旁腺素pth具有生物活性的n-末端区域。本药的免疫学和生物学特性与内源性甲状旁腺素pth以及牛甲状旁腺素pth(bpth)完全相同。本药刺激骨形成和骨吸收，可减少绝经后妇女骨折的发生率，根据给药方式的不同，还能提高或降低骨密度。连续输注可导致甲状旁腺素pth浓度持续增高，因此比仅引起血清甲状旁腺素pth浓度短暂增高的每日注射法产生的骨吸收作用更强。此外，本药不抑制二磷酸腺苷诱导途径或者胶原诱导途径的血小板聚集反应。现有的特立帕肽的合成方案来看，其总收率均不高，最高的为42.1％。较低的总收率是限制特立帕肽生产效率的主要因素，需要改善现有的合成方案来提高其总收率。本课题对于特立帕肽纯化方法开发目的是让我们找到好的方法纯化得到更高收率。

2. 研究内容和预期目标

研究内容：特立帕肽是第一种获得美国食品及药物管理局fda批准的骨形成剂类新药，这种甲状旁腺激素的衍生物可以通过增加成骨细胞的活性及数量而促进骨生长，而目前的常规骨质疏松药物一般只是作用于破骨细胞而减缓或阻断骨质流失，特立帕肽是由礼来药厂生产的，涉及到1637例绝经后骨质疏松症患者的临床研究结果显示，与那些只服用了钙和维生素d补加剂的患者相比，96％的患者在接受该药治疗后，其脊柱和臀部的骨(矿物质)密度bmd均表现出显著增加，此外还发现，该药能够分别减少发生脊柱骨折和其他类型骨折危险的65％和53％。

对于本品制备的方法，已有专利技术进行公开。中国专利cn102731643a公开了以2-氯三苯甲基氯树脂(2-ctc树脂)为固相载体风味5个片段进行偶联，虽然该方法可以缩短合成周期，但是其总收率最高仅为32.2％。

当下比较流行的合成方法为固相逐步合成法(spps)，该方法具有操作简单和设备要求低的优点，但是该方法也因为总收率较低而限制了特立帕肽的生产效率。如专利cn103467595a，其在逐步合成偶联到17位丝氨酸时，以未保护的丝氨酸和16位天冬酰胺羧基进行酯缩合，在获得粗肽后再将酯键转化为酰胺键，其总收率最高为42.1％。专利cn104017064a也公开了一种逐步合成方法，其在合成16-17位氨基酸时采用假脯氨酸二肽、并以特定的裂解液裂解，其总收率最高为38％。专利cn104530218a公开了一种逐步合成方法，以王树脂或2-ctc树脂为固相载体合成，其总收率为34.72％。

综合上述现有的特立帕肽的合成方案来看，其总收率均不高，最高的为42.1％，虽然cn103467595a在其中声称其总收率介于30-50％，但是根据其实施例的详细记载，最高仅为42.1％。较低的总收率是限制特立帕肽生产效率的主要因素，需要改善现有的合成方案来提高其总收率。

3. 研究的方法与步骤

研究方法：充分利用现代科技文献的方法和手段，如internet、网上图书馆、电子期刊等数据库，查阅相关特立帕肽的纯化方法及影响其纯化因素方面的科技文献资料，并对文献进行分析研究，在其基础上找到新的特利帕太的纯化方法。

步骤：1.将粗肽用乙腈和水充分溶解溶解

2.利用高效液相色谱仪进行纯化，并分析

4. 参考文献

[1] 张颖,彭永德.骨质疏松症治疗新药特立帕肽[j].世界临床药物，2004, 25（12）：725-729

[2]盛正妍,刘皋林,宋庆明. 特立帕肽治疗骨质疏松症的应用进展[j]. 国际药学研究杂志, 2008, 35(6): 415-424

[3]杨柳,余邦良. 高效液相色谱法测定特立帕肽含量的方法研究[j].药物分析杂志, 2011,31(5):980-982

5. 计划与进度安排

（1）2022-3-5～2022-3-16，收集及查阅资料，掌握本课题国内外最新研究现状、存在的问题，完成课题开题报告。

（3）2022-3-19～2022-4-13，在查阅文献资料的基础上，确定研究路线和实验方案,准备实验药品和实验仪器。

（4）2022-4-16～2022-6-8，完成合成实验、性能测试及结构表征。