1. 研究目的与意义
特立帕肽 forteo (teriparatide) 是第一种获得美国食品及药物管理局 fda 批准的骨形成剂类新药，用于原发性骨质疏松及性腺功能减退性骨质疏松、绝经后骨质疏松。特立帕肽 [hpth(1-34)] 是一种合成的多肽激素，为人甲状旁腺素 pth 的 1-34 氨基酸片段，该片段是含有84个氨基酸的内源性甲状旁腺素 pth 具有生物活性的 n- 末端区域。本药的免疫学和生物学特性与内源性甲状旁腺素 pth 以及牛甲状旁腺素pth(bpth)完全相同。本药刺激骨形成和骨吸收，可减少绝经后妇女骨折的发生率，根据给药方式的不同，还能提高或降低骨密度。连续输注可导致甲状旁腺素 pth 浓度持续增高，因此比仅引起血清甲状旁腺素 pth 浓度短暂增高的每日注射法产生的骨吸收作用更强。
关于特立帕肽制备方法，国内外已经有所报道。专利 cn1198644 涉及特立帕肽组合物，专利 cn1281467 涉及其结晶专利。 cn101134963、cn1706947、cn102304518 等专利涉及特立帕肽的基因工程方法制备。中国专利 cn102731643 涉及特立帕肽的合成方法，其采用 2-ctc 树脂，通过片段法合成。cn103467595 固相法合成特立帕肽，其应用了 ser 的 o-n 酰基迁移反应。
通过基因工程法合成特立帕肽工作量大，三废严重。而纯粹的液相化学合成特立帕肽由于操作繁杂、合成周期长而暂时未见报道。固相合成特立帕肽具有其优势，操作简单、生产周期短。cn102731643 通过片段法合成特立帕肽，总收率32%。
2. 研究内容和预期目标
研究内容：
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学习利用现代科技文献的查阅方法和手段，查阅有关研究特立帕肽的科技文献资料，并对文献进行综合、分析、研究。在此基础上，设计合成含特立帕肽，拟定出具体实验方案，写出开题报告。
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学习多肽合成基础知识，掌握多肽合成实验技能。
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特立帕肽的固相合成方法，以Wang树脂为固相载体以Fmoc 保护的苯丙氨酸 (Fmoc-Phe-OH) 为起始氨基酸偶联得到 Fmoc-Phe- 树脂，再依次偶联剩下所有氨基酸得到特立帕肽肽树脂；在该合成方法中主要利用对比的方法来研究合成过程中的投料比例、缩合试剂的选择、以及裂解条件、反应温度等。通过HPLC对比粗肽纯度、杂质情况及峰面积大小来确定最优工艺。拟设定的方案如下：
表1
投料比
批号
纯度
峰面积
图谱编号
1.5倍
2倍
3倍
4倍
表2
缩合试剂
批号
纯度
峰面积
图谱编号
HOBT/DIC
HBTU/DIPEA
PyBop/DIPEA
表3
反应温度
批号
纯度
峰面积
图谱编号
20℃
25℃
30℃
35℃
表4
裂解条件
批号
纯度
峰面积
图谱编号
经典（TFA:苯甲硫醚：EDT:苯甲醚）
TFA:TIS:H2O=95:2.5:2.5
TFA:H2O=95:5
通过上述实验数据的对比优化出最优工艺，利用上述所有考察条件中的最优条件合成一批特立帕肽肽树脂，然后用考察出的最优裂解条件裂解该批特立帕肽肽树脂得到特立帕肽粗肽，利用高效液相纯化制备的方法将粗肽溶液进行梯度洗脱纯化，以体积比 0.1%—0.4% 的硫酸和体积比 0.1%—0.4% 醋酸的水溶液用氨水调 pH 值 5.0—6.0 后的溶液为 A 相，乙腈为 B 相，梯度 ： 20%—40% 洗脱 ；盐析 ；用含 3%—10% 乙腈的醋酸铵溶液冲洗，用十八烷基硅烷键合硅胶高效液相色谱进行转盐，醋酸水溶液乙腈体系洗脱。转盐后的溶液经旋转蒸发仪减压（33℃～35℃），转速40转/min，冷凝温度-10～-15℃，浓缩至浓度为200～300mg/mL即可。
将上步分装好的浓缩液冷冻干燥得白色粉末，即得到特立帕肽成品，再进行MS确认。
4. 参考文献
[1]张颖,彭永得.骨质疏松症治疗新药特立帕肽[j].世界临床药物，2004, 25（12）：725-729
[2]盛正妍,刘皋林,宋庆明. 特立帕肽治疗骨质疏松症的应用进展[j]. 国际药学研究杂志, 2008, 35(6): 415-424
[3]杨柳,余邦良. 高效液相色谱法测定特立帕肽含量的方法研究[j].药物分析杂志, 2011,31(5):980-982
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（1）2017-2-27~2017-3-12（第二、三周）在查阅文献资料的基础上，写出开题报告。
（2）2017-3-13~2017-6-4（第四周到第十五周）完成合成实验、hplc及ms分析。
（3）2017-6-5~2017-6-18（第十六到十七周）撰写毕业论文并答辩。
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