番茄 IAA14 基因的克隆、表达及其生物信息学分析开题报告

 2022-01-26 09:38:32

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

通过对番茄基因 sliaa14 的克隆、表达来研究其对番茄侧根的影响并进行生物信息学分析。以番茄为模式植物研究生长素信号转导相关的 iaa 基因的生物学功能,对解释番茄单性结实可能的分子机理,阐明生长素信号转导的复杂分子机制具有重要的理论意义和指导意义。目前对于该基因的研究尚处于起步阶段,相关的文献报道较少,但其应用前景相当可观,尤其是该基因对根系的调控会对作物的生长有着十分重要的意义。

参考文献:

[1]何开平,吴楚. aux/iaa和arf蛋白对植物侧根形成的影响[j]. 现代农业科技,2011,22(9):55-58.

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:研究番茄SLIAA14基因对其侧根的影响。

研究内容:让番茄IAA14基因成功表达并成功测序。通过番茄IAA14基因引物的设计、以番茄RNA为模版的PCR扩增、DNA的回收纯化、感受态细胞的连接转化、菌液PCR、测序及生物信息学分析等一系列实验来研究。

其中较为关键的有引物的设计,及最终产物的测序。

3. 研究的方法与方案

研究方法:实验法、文献研究法。

涉及到的技术有引物设计、pcr技术、琼脂糖凝胶电泳技术、dna的酶切与连接、基因的测序以及生物信息学分析。

实验方案:针对基因设计引物并从中提取目的基因,接着提取t载体及pet28载体并对目的基因及t载体进行双酶切再将有活性的目的基因与t载体连接,进行转化扩繁及菌液pcr进行测序,再将pet28载体双酶切并连接目的基因进行转化扩繁、菌液pcr测序,然后诱导表达,对表达产物测序,检测目的基因体内事事转录水平,最后进行生物信息学分析。

本实验涉及到的技术手段均为现今科研中已经成熟的技术且有理论的支持,因此该实验具有较高的可行性。

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4. 研究创新点

本实验通过对番茄特定基因的研究并通过相关的生物信息学分析手段来推测其对番茄实际生长的作用及影响,并且引物是通过Primer Premier 6.0 DEMO软件自行设计。

5. 研究计划与进展

实验计划在3个月内完成整个实验,主要分为三个阶段。第一个阶段完成引物设计并尝试PCR扩增测试出最佳条件,再根据最佳条件进行纯化回收。第二阶段对纯化回收后的IAA14基因连接T载体进行转化、再以菌液为模板进行PCR检测,第三阶段选择正确的产物进行测序并对测序结果进行相关的生物信息学分析及预测。

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