重组大肠杆菌高效表达鼠李糖苷酶DthRha的条件优化开题报告

 2021-10-17 18:33:45

1. 研究目的与意义

α-l-鼠李糖苷酶是一种能够特异性切割多种天然糖苷化合物末端非还原性鼠李糖基的糖苷水解酶,在自然界中有较广泛的分布。

目前,在哺乳动物组织,细菌,真菌,植物中都发现了鼠李糖苷酶。

黄酮类化合物因其独特的生理活性成为了研究热点,如人参皂苷,淫羊藿黄酮等。

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2. 国内外研究现状分析

对大肠杆菌使用培养基培养,产量低且成本高,难以批量生产。近年来,高密度发酵的受到了研究者的广泛关注及研究。能够高产,高密度、浓度培养是工业生产的目标及需求。对于大肠杆菌和重组大肠杆菌来说,高密度发酵可以减少反应物体积,也可以缩短反应时间及周期,从而达到减少成本,提高产量的目的。而目前因为大多数鼠李糖苷酶多为中温酶,反应温度并不高,因此无法在高温条件下保持热稳定性,无法通过提高温度增加原料的溶解度。所以目前来说,国内外都难以对于鼠李糖苷酶进行批量高效的生产。

3. 研究的基本内容与计划

通过高密度发酵技术,可以有效地提高菌体细胞量,更为高效地获得目的产物。同时利用高密度发酵可以减少培养体积,缩短生产周期,达到降低成本的目的。

本实验通过单因素摇瓶实验及高密度发酵实验,探究诱导剂浓度,温度,诱导时机,诱导时长,诱导后生长比速率,诱导初始od值对于鼠李糖苷酶dthrha表达的影响,从而通过优化发酵条件及高密度发酵,达到一个使dthrha鼠李糖苷酶高效表达的目的。

通过发酵条件的优化,提高重组菌表达dthrha鼠李糖苷的水平。目前,天然鼠李糖苷酶活力较低,无法满足于大规模生产,因此利用重组大肠杆菌表达鼠李糖苷酶不失为一种可行的办法。通过对于发酵条件的优化,为dthrha鼠李糖苷酶大规模工业化生产奠定基础。

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4. 研究创新点

α-l-鼠李糖苷酶是一种糖苷水解酶,广泛分布于自然界中的细菌和真菌中。

鼠李糖苷酶在实际工艺中具有重要的应用价值,如工业上去除柑桔汁中柚皮苷的苦味。

国内外对鼠李糖苷酶的研究主要集中于黑曲霉,白曲霉等一些真菌来源的酶,而对细菌来源的鼠李糖苷酶研究较少。

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