核桃属三种木材分子鉴定开题报告

1. 研究目的与意义

通过对三种核桃属木材（核桃木，核桃楸，美国黑核桃木）进行分子层面的研究，确定三者在dna序列的差异，将这三种木材逐一区分开来，从而建立它们的分子鉴定体系，达到核桃属木材快速分子识别鉴定的目的。

核桃属的木材解剖构造相近，通过形态学方法难以区分。

对三个同核桃属不同树种进行分子层面的研究，建立起分子鉴定体系，有助于深入研究方法，更加准确地识别鉴定木材，更好地规范木材交易市场，完善相关的法律法规。

2. 国内外研究现状分析

20世纪80年代初，murray采用ctab法从植物新鲜叶片组织中提取到了高质量dna，该方法最适合提取含酚量多的植物的dna，最初用来提取草本植物dna，后发现提高其浓度也可以提取高质量木本植物dna。

此方法操作简便，dna产率高，能有效去除糖类等杂质，目前成为植物dna提取最有效的方法。

科研人员对植物新鲜叶片dna的提取进行了完善，从栎属，象牙海岸格木，欧洲红豆杉等新鲜叶片中提取到了高质量的dna；1998年，filippis等利用十六烷基三甲基溴化铵（ctab）法成功提取出刺槐dna，后继学者采用改良的catb或商业试剂盒先后从栎属，松木，棱柱木，龙脑香科等多种多种木材中提取出可满足不同片段长度pcr扩增的dna，利用分子标记技术实现了几种木材材种的鉴定；2013年，伏建国等通过比较不同的木材dna提取和纯化方法，摸索出了适合黄檀属木材的ctab-sds磁珠相结合的提取和纯化体系，利用巢式聚合酶链式反应(pcr)扩增出443bp的matk基因片段，共发现12个碱基位点差异，可逐一区分所研究的七种黄檀木；2016年，王英及骆嘉言，石江涛参与研究了浙江楠，紫楠，桢楠三者的dna提取及issr标记鉴别，得到了相应结论：适于用改良的ctab-sds法和ctab法进行dna提取，序列扩增筛选出7条稳定，条带清晰且多态性好的引物，确定其最佳退火温度。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：所用仪器：1.台式冷冻离心机：分离混合溶液，沉淀dna；2.紫外分光光度计：检测dna浓度与纯度；3.梯度pcr扩增仪：设定pcr的程序及其扩增；4.琼脂糖水平电泳仪及全自动凝胶成像仪：检测分析pcr扩增结果及观察，拍照，保存；5.电热恒温水槽及震荡型恒温金属浴：特定温度下温浴试剂；6.磁力搅拌器及涡旋机：用于混匀试剂；7.电子天平，超低温冰箱，高温高压灭菌锅，微波炉，烘箱，枪头等。

研究核桃木（juglans regia），核桃楸（juglans mandshurica maxim），美国黑核桃木（juglans nigra ）三种核桃属木材的dna序列差异，做到三者分子层面的准确鉴定。

1）dna的提取：改良ctab-sds法2）dna质量检测3）issr引物筛选4）样本pcr扩增5）琼脂糖凝胶电泳检测6）数据图像分析：列表整合各项实验数据，观察拍摄相关图像，描绘issr聚类图进行聚类分析。

4. 研究创新点

1.传统核桃木，核桃楸，美国黑核桃木鉴别多靠专业人员进行形态解剖学方法，容易受鉴别者经验，处理手段等非客观因素的影响，常常使鉴别的稳定性和准确性受到影响，而分子鉴别能很好地避免这个问题；分子鉴定更容易建立规范化鉴定体系，即使外观，生长状况等区别再大，树种的DNA序列是相对稳定的，研究分子层面的鉴定方法，能更好的规范木材市场，保护珍贵树种，促进木材的合法化贸易。