1. 研究目的与意义
1. 本课题的研究意义
梨是世界上重要的落叶果树之一。梨树栽培历史悠久,资源丰富,我国的栽培面积和产量一直居世界首位[1-2]。随着人民生活水平的不断提高,梨的生产技术在迅速发展,尤其是对梨果实质量的研究越来越受到广泛关注,而梨石细胞是影响其鲜果品质和加工工艺的关键因素之一[3-4]。梨石细胞是一种强烈木质化的细胞,过氧化物酶被认为是植物木质化过程中的重要的酶,近年来不断有研究揭示钙离子能调控pod的合成。为提高梨品质,针对梨石细胞形成机理,选择梨木质化形成过程中过氧化物酶(pod)作为研究对象,对其在植物石细胞木质化中的作用和与钙离子和钙调素之间的关系进行研究。
2. 国内外研究概况
2. 研究内容和预期目标
1.研究的目标
(1)掌握酶活测定方法及细胞生物学的理论和技术、方法
(2)巩固专业知识,提高操作能力和科学素养
3. 研究的方法与步骤
1.研究方法和技术路线
(1)冷冻法测石细胞含量
取1.0cm3果肉切块,于-16~-20℃冰柜中冷冻24h,样品解冻后,22000 r/min离心1、3、5 min[20]。将匀浆转移至1000ml烧杯中。加水至800ml,用玻璃棒搅拌1 min,静置3min,倾出上层悬浮液。如此反复漂洗,直至洗净。收集最初几次漂洗倾出的悬浮液,漂洗。合并所得石细胞, 用粗滤纸过滤。将石细胞铺开, 连同滤纸置烘箱中60~65℃烘2h,取出,干燥器中冷却至室温。收集石细胞,称量,精确到1 mg。
4. 参考文献
目前,人们对木质素代谢中关键酶POD的研究主要集中在POD酶活变化等方面,而对其他方面的研究还比较少。
因此,本试验探讨外源钙处理对梨石细胞中不同形态POD的影响,研究石细胞发育、木质素含量与POD活性变化的关系,以及钙处理对石细胞的影响,通过了解POD的类型,分析其酶学特性,为阐明砀山酥梨石细胞发育机理奠定基础,也为今后通过生物技术控制梨石细胞含量,提供理论借鉴和实践依据。
5. 计划与进度安排
第一阶段 2022.7-2022.4
前期准备、实验路线确定、文献综述写作、样品处理
第二阶段 2022.4-2022.9
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