MPKKK7基因植物表达载体的构建及转基因本氏烟愈伤组织的制备开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

所在实验室的前期研究发现在本氏烟中瞬时表达mpkkk7基因能够促进tswv的增值和系统侵染。因此，本研究拟构建mpkkk7基因的植物表达载体，并制备转mpkkk7基因的本氏烟愈伤组织，从而培育转mpkkk7基因的本氏烟并以此为材料探索进一步探索mpkkk7蛋白在tswv侵染过程中的作用，为深入解析tswv的致病分子机制奠定基础。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：构建mpkkk7基因的植物表达载体；制备转mapkkk7基因的本氏烟愈伤组织。研究内容：构建mpkkk7基因的植物表达载体p1300-yfp-mpkkk7；在荧光显微镜下观察yfp-mpkkk7融合蛋白的表达情况以确定载体能够工作；通过叶盘法制备转mpkkk7基因的本氏烟愈伤组织。拟解决的关键问题：

得到能够在本氏烟中表达mpkkk7基因的表达载体p1300-yfp-mpkkk7；获得转mapkkk7基因的本氏烟愈伤组织。

3. 研究的方法与方案

研究方法

（1）通过酶切连接的方法构建mpkkk7基因的植物表达载体p1300-yfp-mpkkk7；

（2）通过农杆菌浸润的方法将p1300-yfp-mpkkk7导入到本氏烟表皮细胞，在荧光显微镜下观察yfp-mpkkk7融合蛋白的表达情况；

（3）通过叶盘法制备转mpkkk7基因的本氏烟愈伤组织。

4. 研究创新点

番茄免疫受体蛋白Sw-5b与j基因MAPKKK7之间的互作关系的确定该基因是否表达。

5. 研究计划与进展

研究计划

①2018年9月-10月 学习基本实验操作和一些分子生物学的技术，了解相关背景知识。阅读文献，收集相关番茄斑萎病毒的资料，整理资料内容；

②2018年11月 构建mpkkk7基因的表达载体p1300-yfp-mpkkk7，并在荧光显微镜下观察yfp-mpkkk7融合蛋白的表达情况以确定载体能够工作；

③2018年12月-2019年2月 通过叶盘法制备转mpkkk7基因的本氏烟愈伤组织；