鸟苷酸激酶突变株mAtGK1真核表达载体构建开题报告

 2021-08-08 21:53:44

1. 研究目的与意义

鸟苷酸及其代谢衍生物是胞内核酸合成的底物,也是重要的信号分子。

鸟苷酸(gmp)通过鸟苷酸激酶(gks)和核苷二磷酸激酶 (ndk)催化,分别产生二磷酸鸟苷(gdp)和三磷酸鸟苷(gtp),gtp在鸟苷酸环化酶(gc)催化下,生成胞内重要的信号分子环化鸟苷酸(cgmp)。

gks直接影响gdp/gmp胞内比例,进而影响cgmp的产生。

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2. 国内外研究现状分析

国内:广东医学院附属医院耳鼻咽喉科医生在《第三军医大学学报》发表的文章中认为环鸟苷酸依赖性蛋白激酶在no释放剂和环鸟苷酸促鼠小脑颗粒细胞的存活和抵抗酒精性神经毒性过程中具有重要的作用。

东南大学医学院分子医学研究所发育遗传学朱克毅, 万永奇, 谢维教授在《生物化学与生物物理进展》发表的文章中提到maguks蛋白家族成员位于细胞表面,其通过pdz,sh3,gk结构域调节离子通道受体的聚集,构建细胞骨架,参与信号转导,调控细胞周期进程,并与机体神经发育密切相关。

国外:北京大学医学部生理学与病理生理学系与美国加州大学洛杉矶分校医学院海港医学中心在《生理科学进展》一刊中联合发表文章,认为环鸟苷酸(cgmp)依赖的蛋白激酶(pkg)是一氧化氮-cgmp的主要细胞内受体, 在哺乳动物细胞中分为pkg-Ⅰ 和pkg-Ⅱ两型。最近的研究证明,pkg的表达水平和活性改变与动脉粥样硬化和再狭窄、 高血压、 糖尿病心血管病变以及硝酸盐耐受等的发病机制有密切关系。

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3. 研究的基本内容与计划

本课题以拟南芥突变体为起始材料,拟克隆该基因cdna序列,以ppic9k为框架,构建毕赤酵母表达载体,转化毕赤酵母中,通过诱导表达该激酶,利用融合标签纯化目标蛋白,测定酶活。另外,通过pcr点突变试剂盒进行目标位点突变,表达蛋白,分析酶活。进行突变株与野生型激酶酶活比较。

2016-01-012016-02-19:明确任务,检索文献,开题报告。

2016-02-202016-05-15:试验、观测、采样、分析测定。

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4. 研究创新点

高等植物鸟苷酸激酶突变型真核体外表达和酶活测定。

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