鸟苷酸激酶AtGK1原核表达载体构建开题报告

1. 研究目的与意义

鸟苷酸及其代谢衍生物是胞内核酸合成的底物，也是重要的信号分子。

鸟苷酸（gmp）通过鸟苷酸激酶（gks）和核苷二磷酸激酶 （ndk）催化，分别产生二磷酸鸟苷（gdp）和三磷酸鸟苷（gtp），gtp在鸟苷酸环化酶（gc）催化下，生成胞内重要的信号分子环化鸟苷酸（cgmp）。

gks直接影响gdp/gmp胞内比例，进而影响cgmp的产生。

2. 国内外研究现状分析

膜相关性鸟苷酸激酶(membrane associated guanylate kinase，maguk)是一类突触后致密蛋白(postsynaptic density，psd)，定位于突触后膜的突触后致密区，包括psi)一95、sap一102、psd一93和sap．97。

maguk家族成员含有多个蛋白结合位点，这些特殊的结合位点负责介导多种信号的转导。

maguk参与中枢神经系统疾病发生和发展机制，已成为神经科学研究的热点。

3. 研究的基本内容与计划

提取野生型拟南芥花器官的RNA，反转录形成cDNA，利用基因特异引物扩增鸟苷酸激酶的cDNA序列，进行TA克隆和测序；构建原核表达载体并转化到BL21表达菌株中，利用IPTG来诱导蛋白表达，通过PAGE分析表达情况，借助表达载体上标签纯化表达蛋白；以GMP和ATP为底物，对已纯化的鸟苷酸激酶进行酶活测定。

自2016年2月份开学起，每天除上课时间外，在老师的带领下去实验室完成相关实验

4. 研究创新点

高等植物鸟苷酸激酶体外表达和酶活测定。