1. 研究目的与意义
青钱柳集药用、保健、材用和观赏等多种价值于一身，是一种很有开发利用前景的多用途特有珍贵药用树种。经过近二十年的开发利用，有限的资源越来越少，使得青钱柳已被列入我国重点保护濒危植物之一。现存的天然林也只零星分布于深山老林和一些自然保护区中。这严重影响了青钱柳树种的开发利用和迁地保护。青钱柳分布于我国亚热带地区，由于基因突变、生态隔离及自然选择等原因，分化并产生了种内有差别的地理生态种源。本论文以青钱柳药理作用有关的多糖为主要研究对象，通过对各种源多糖的差异性研究，探讨青钱柳多糖的地理变异规律和年动态变化规律，阐明青钱柳多糖的时空变异规律，为青钱柳优良药用种源选择和开发利用提供理论依据。
2. 国内外研究现状分析
青钱柳是我国特有的天然资源, 目前国内学者对青钱柳的化学成分和药理作用等方面研究较多。青钱柳多糖属于杂多糖，其中一种由6种单糖组成，分别是鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。青钱柳多糖具有降血糖作用，目前研究其药理作用的比较多。李磊等通过四氧嘧啶小鼠模型验证了青钱柳多糖能增强糖尿病小鼠对葡萄糖的耐受力，灌胃青钱柳多糖四周后，小鼠血糖值比糖尿病模型组降低41．3%，具有显著的降血糖作用。刘听等采用噻唑蓝(mtt)法，研究了青钱柳多糖对人宫颈癌hela细胞和人脐带内皮细胞(huvec)生长的影响。结果表明青钱柳多糖pcpi、pcpii在50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml浓度条件下，可极显著抑制hela细胞生长(p＜ 0． 01 ) 。青钱柳多糖pcpi、pcpii 对huvec 细胞生长有一定影响。青钱柳可抑制大鼠血清总胆固醇的升高，使大鼠肝重/体重比值升高。由于青钱柳多糖具有抗肿瘤、降血糖等作用，引起人们广泛关注。
对于多糖提取方法，前人的研究很多。陈木森等采用苯酚-硫酸法, 对青钱柳叶多糖的水提取法、提取工艺以及不同采集期的多糖含量进行了研究。结果表明, 水提法的精密度rsd%为2. 89%, 重现性rsd% 值为1. 72%, 稳定性rsd%值为3. 1%; 通过l9( 34 ) 正交试验得出水提法提取青钱柳多糖的最佳提取时间为7 h, 料液比为1 ：20, ph 9; 青钱柳叶在5- 8 月的多糖含量为2. 19%。 上官新晨等利用超声波法提取青钱柳多糖, 研究了超声时间、超声功率、料液比对青钱柳多糖得率的影响, 并采用正交试验对青钱柳多糖提取工艺进行优化设计。结果表明, 超声波法提取青钱柳多糖的最佳条件为: 超声时间70 min, 超声功率1200w, 料液比1:10。超声功率和超声时间对提取青钱柳多糖的影响分别为显著差异和极显著差异, 因此利用超声波法提取青钱柳多糖可以缩短提取时间, 提高得率. 舒任庚等采用苯酚-浓硫酸显色法,于490 nm 处测吸光度。结果表明，青钱柳嫩叶中多糖含量为0.6532%；平均回收率99.03%；r =0.9991。由此，建立青钱柳叶中多糖含量的测定方法，该方法简便、快速,结果准确、可靠,适合多糖的含量测定。谢建华等建立一种苯酚一硫酸分光光度法测定青钱柳多糖的方法。采用先除杂后水提分离提取青钱柳多糖, 以葡萄糖标准液绘制标准曲线, 用苯酚一硫酸法比色测定青钱柳多糖含量, 检测波长48 nm ，并研究了显色时间、显色温度、苯酚及硫酸用量对糖含量测定的影响。结果显示,加入1 ml 5% 的苯酚溶液, 硫酸5 m l , 显色温度100℃ , 在水浴中加热2 min 时测定条件最优。该方法快速、显色稳定、重现性好、 平均回收率98 .2% , rsd 2.5% , 适用于青钱柳多糖的含量测定, 测得3批青钱柳多糖的平均含量为4.47 %。陈木森等研究了8 种树脂对青钱柳多糖的静态吸附性能, 筛选出一种吸附较好的树脂, 并利用柱层析进行青钱柳多糖的纯化研究。结果表明， d301r 树脂对青钱柳多糖吸附量最大; d301r 树脂在吸附液30 ℃ , ph 为7, 浓度为4 mg / ml, 吸附流度为1. 5 ml/ min 时吸附较强; 用0. 4 mol/ l 氯化钠洗脱效果最好, 洗脱率可达到82. 12%。
不同种源青钱柳多糖的差异研究较少。粟君等的实验结果表明，不同种源间青钱柳根茎叶多糖的含量不存在显著差异 。青钱柳根部多糖含量变化范围为2.04% ～ 1．61%。以湖南沅陵的青钱柳多糖含量最高，比四川沐川的高出15．25%，比安徽舒城的高26．71%; 青钱柳茎部多糖含量变化范围为2.17% ～ 2．15%。四川沐川的青钱柳多糖含量最高，达2．17%，比安徽舒城和湖南沅陵的均高出0.93%;青钱柳叶片多糖含量变化范围为1.22% ～ 1.14%。安徽舒城的青钱柳多糖含量最高，达1．22%，分别比湖南沅陵和四川沐川的均高出7．0%左右。陈金华等分析青钱柳叶中的主要化学成分：多糖、黄酮、皂苷、香豆素的含量，并比较了不同产地青钱柳叶中这四种主要成分含量的差异，结果表明：不同产地青钱柳叶中多糖含量相近，其余三项的含量均是湖南省绥宁县的高于江西省修水县的。虽然他们的实验结果是一致的，但都没有对不同种源多糖的差异进行专门的研究。
3. 研究的基本内容与计划
一、研究方案
本文以2011年6月至10月（每月中旬采样）间采收的安徽舒城种源、浙江安吉种源、湖北鹤峰种源、江西庐山种源、贵州剑河种源、云南昆明种源、福建漳浦种源等7个种源10个家系的两年生青钱柳苗叶片干样为材料，研究青钱柳多糖的地理变异规律和年动态变化规律。2012年3月至5月测定叶片中多糖含量，每个样测三个重复。
二、研究方法多糖的测定
4. 研究创新点
青钱柳是我国特有的天然资源, 目前国内学者对青钱柳的化学成分和药理作用等方面研究较多。在总结前人研究成果的基础上, 结合当前的发展趋势, 提出了在青钱柳人工林资源培育上需要深入研究和探讨的问题,旨在为今后青钱柳的开发利用和产业化经营提供依据。青钱柳分布于我国亚热带地区，由于基因突变、生态隔离及自然选择等原因，分化并产生了种内有差别的地理生态种源。本论文以青钱柳药理作用有关的多糖为主要研究对象，通过对各种源多糖的差异性研究，探讨青钱柳多糖的地理变异规律和年动态变化规律，阐明青钱柳多糖的时空变异规律，为青钱柳优良药用种源选择和开发利用提供理论依据。
