松材线虫携带病毒的分离及其核酸类型鉴定开题报告

1. 研究目的与意义

在松材线虫病发生以来的100多年里，研究者对影响该病害发生发展所涉及的寄主松树、松材线虫、媒介昆虫、真菌和细菌等多种生物因子进行了广泛而深入的研究，但很少与病毒相关的研究报道。病毒是否普遍存在于松材线虫体内，它们如何在线虫体内传播，它们的存在是否与松材线虫的致病力相关，目前尚不得而知。因此，松材线虫携带病毒是亟待加强的研究领域。通过对松材线虫携带病毒的观察和研究，能够让我们更全面地认识松材线虫病。

2. 国内外研究现状分析

国内外有关线虫携带病毒的研究较少。1959年，loewenbergetal.曾报道根结线虫受到一种类似病毒的感染，造成可观察到的生长衰弱症状，但是未观察到病毒颗粒。通过电镜观察发现植物寄生线虫dolichodorusheterocephalu及食蚊罗索线虫(romanomermisculicivorax)体内观察到有病毒状颗粒，但理化性质未定（zuckermanetal.，1973；poinaretal.，1977）。1980年，poinaretal.在昆虫病原线虫施特克尔霍夫索属线虫(thaumamermiscosgrovei)及其寄主体内发现虹彩病毒。2011年，flix等首次报道在秀丽线虫（caenorhabditiselegans）及其近亲c.briggsae体内发现了2种诺达病毒（nodaviruses）。通过电镜观察发现诺达病毒感染线虫表现出细胞质结构重组、细胞核伸长、核膜消失、细胞融合等现象，其中最显著的是脂肪粒消失。这些病毒可以侵染野生型虫株n2等实验室培养的多个线虫虫株。通过荧光免疫及原位杂交手段，发现这些病毒存在于秀丽线虫肠道细胞中（franz,etal.,2014）。继flix后，bekaletal.（2011）采用高通量测序技术等手段在大豆胞囊线虫（heteroderaglycines）体内发现了4种病毒。2014年，bekaletal.又报道在大豆胞囊线虫中发现一种新病毒，黄病毒（flavivirus

）。

国内外有关线虫携带病毒的研究较少。1959年，loewenbergetal.曾报道根结线虫受到一种类似病毒的感染，造成可观察到的生长衰弱症状，但是未观察到病毒颗粒。通过电镜观察发现植物寄生线虫dolichodorusheterocephalu及食蚊罗索线虫(romanomermisculicivorax)体内观察到有病毒状颗粒，但理化性质未定（zuckermanetal.，1973；poinaretal.，1977）。1980年，poinaretal.在昆虫病原线虫施特克尔霍夫索属线虫(thaumamermiscosgrovei)及其寄主体内发现虹彩病毒。2011年，flix等首次报道在秀丽线虫（caenorhabditiselegans）及其近亲c.briggsae体内发现了2种诺达病毒（nodaviruses）。通过电镜观察发现诺达病毒感染线虫表现出细胞质结构重组、细胞核伸长、核膜消失、细胞融合等现象，其中最显著的是脂肪粒消失。这些病毒可以侵染野生型虫株n2等实验室培养的多个线虫虫株。通过荧光免疫及原位杂交手段，发现这些病毒存在于秀丽线虫肠道细胞中（franz,etal.,2014）。继flix后，bekaletal.（2011）采用高通量测序技术等手段在大豆胞囊线虫（heteroderaglycines）体内发现了4种病毒。2014年，bekaletal.又报道在大豆胞囊线虫中发现一种新病毒，黄病毒（flavivirus

3. 研究的基本内容与计划

（1）2018.1.10―2018.2.15：查阅文献，预备试验；（2）2018.2.16－2018.3.16：松材线虫的培养，大量收集虫液；（3）2018.3.16－2018.5.16：松材线虫携带病毒的分离、纯化及透射电镜观察；病毒的核酸类型鉴定；不同松材线虫虫株体内病毒的检测。（4）2018.5.21－2018.6.10：整理试验数据，撰写毕业论文，准备答辩。

4. 研究创新点

目前，松材线虫携带病毒研究在国际上仍较少。本论文开展松材线虫携带病毒的分离和核酸的鉴定，填补了国内外该研究领域的空白。