杉木胚性愈伤组织的超低温冷冻保存开题报告

1. 研究目的与意义

研究目的：组织培养技术是种质保存的有效途径之一，然在长期的继代培养过程中容易产生细胞学的变化，导致遗传的不稳定性。对杉木胚性愈伤亦然。具有胚性的杉木愈伤随着时间的推移，会逐渐丧失胚性，同时也就丧失了体胚发生的能力。超低温冷冻保存能有效地长期保存细胞活力和形态发生的潜能，利用这种技术能更好地保存种质资源。

研究意义：杉木是我国特有的针叶树种之一，在南方分布广泛。其良好的材性成为我国重要经济用材和造林树种。常规育种手段存在周期长、种子大小年现象等问题，而体胚发生技术能有效解决这些问题，实现商业化工厂化生产。但由于材料基因型、生长时期等因素的影响，要培养出具有体胚发生能力的胚性愈伤存在很大的困难，而随着继代培养，愈伤胚性无法长久保持，因而急需一种能长久维持愈伤活力和潜能的种质保存手段。将超低温冷冻技术与植物组织培养技术结合起来，有望成为保存种质的最佳方法。

2. 国内外研究现状分析

1973年，nag和street将胡萝卜悬浮培养细胞保存在液氮中一段时间后再培养时，观察到细胞仍可生长，这是超低温保存植物材料的首次报道。

1979年，sala等报道了水稻悬浮细胞的超低温保存，他们观察到冷冻保存化冻后细胞可恢复生长，证明了这种方法在植物中的可行性。

目前，国内外已对100多种植物种质开展了超低温保存的研究，涉及保存的材料有原生质体、悬浮细胞、愈伤组织、体细胞胚、花粉胚、花粉、花药、种子、茎尖分生组织、芽、茎段，甚至植株幼苗等。

3. 研究的基本内容与计划

2012年1月-2012年2 月 实验学习，材料准备，选取体胚发生优良的基因型。

2012年3月-2012年4月 使用不同的预培养方案、冷冻保护剂、冷冻方法、复苏方法观察不同的处理方案下细胞的生长情况，形态的变化，测定数据。整理资料，撰写论文初稿。

2012年5 月 修改论文，准备毕业论文答辩。

4. 研究创新点

本研究项目通过对杉木愈伤组织超低温冷冻保存的研究，建立杉木愈伤组织保存体系，从而有助于杉木种质资源高效、长期、稳定保存体系的建立，可促进杉木这一经济树种的遗传工程改良，无论在基础理论上还是在实际应用上都具有重要的意义。