菊花CmTPL的克隆及载体构建开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

topless（tpl）和 topless-related 蛋白（tpl/tpr）是一类保守的植物转录辅抑制因子家族蛋白，在植物中通过与乙烯反应因子相关的反应抑制基序（ear基序）相互作用而调节植物广泛的生理活动，包括生长发育、花期调控、信号通路调节等一系列生理生化过程[1]。

进一步深入研究该蛋白的作用机理对指导菊花周年生产有着非常重要的意义。

1.1 植物tpl/tpr转录因子的功能tpl/tpr是一类在植物中广泛存在的转录共抑制子(co-repressor)，参与多种植物激素信号转导途径的基因转录抑制作用。

2. 研究的基本内容和问题

1、研究目标：对菊花cmtpl基因进行克隆并构建载体，以对该基因的功能进行进一步研究，丰富和完善菊花花期调控的分子机制。

2、研究内容：以cmccd8转基因菊花为材料，提取其总rna，反转录总rna得到cdna。

利用primer5软件进行引物设计，以cdna为模板进行pcr扩增，获得的产物与载体同时进行kpn i和xho i双酶切, 纯化酶切产物并连接pmd19t载体，转化大肠杆菌感受态，挑菌，摇菌，挑选阳性克隆测序，测序正确则提取质粒，以构建到 pentr1a 入门载体。

3. 研究的方法与方案

研究方法1、rna的提取与纯化2、反转录cdna 3、cdna的pcr扩增4、酵母及表达载体的构建技术路线cmccd8转基因菊花→提取总rna并纯化→反转录cdna→设计引物进行pcr扩增→产物与载体双酶切并纯化，连接载体→转化大肠杆菌感受态，扩增，筛选并测序，提取质粒→目的基因重组，构建载体，酶切并测序验证可行性分析1、该课题选题正确，思路清晰，实验设计合理，具有可操作性。

2、园艺学院观赏园艺菊花实验室为育苗及处理提供场所；学院实验中心拥有的实验设备可完成各项实验技术的实施。

3、指导教师教学和实践经验丰富，具有丰富的专业知识，能够很好的指导该项目各个环节的顺利实施。

4. 研究创新点

（1）立足生产实际存在的问题，以探索指导菊花的周年生产供应为目的展开实验，对生产实践中出现的实际问题提供指导，具有潜在的应用价值。

（2）菊花cmtpl基因片段较长，克隆及载体构建难度较大，具有很强的操作价值。

且后续的tpl/tpr成员在菊花sl调控开花的具体功能研究尚属首次，具有很强的理论意义。

5. 研究计划与进展

研究计划1、2017.09-2017.10，与老师沟通商讨，确定项目课题与实验内容，准备实验材料，并查阅资料学习与本项目相关的研究背景与实验方法。

2、2017.11-2018.01，开展实验，完成菊花cmtpl的克隆。

3、2018.02-2018.04，完成基因酵母和表达载体的构建。