1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
研究意义:
拟通过分析不同的mir156及其靶基因spl成员在葡萄果实发育成熟过程的时空表达及其作用模式的时空变化,鉴定mir156及其靶基因spl家族中参与葡萄果实发育成熟过程的重要成员。通过aba(脱落酸)、naa(生长素)处理,分析重要成员在处理与对照果实中表达差异,验证mir156与spl家族参与葡萄果实发育成熟的重要成员。实验的完成有助于从分子水平认识葡萄果实发育成熟的调控机理,为有效利用基因调控葡萄果实发育成熟过程,改变果实成熟期提供理论依据,同时也为其它果树果实成熟的分子调控机制的研究提供重要参考。
国内外研究概况:
2. 研究的基本内容和问题
研究目标、内容:
为认识mir156介导spl(squamosa promoter binding protein-like)转录因子调控非呼吸跃变型葡萄果实发育成熟的分子机制,结合模式植物spl家族的相关研究,以生产上广泛栽培的鲜食葡萄巨玫瑰为试材,通过aba和naa处理,结合半定量pcr 的方法阐释mir156介导spl转录因子调控葡萄果实发育成熟的分子机制。具体研究内容如下:
(1)葡萄果实发育成熟过程中mir156及其靶基因spl成员的时空表达分析
3. 研究的方法与方案
研究方法:
(1)果实总rna的提取:采用华越洋生物(北京)科技有限公司生产的多糖多酚植物专用rna提取试剂盒(quick rna isolation kit)和本研究室改进的果实多糖多酚总rna提取方法(张彦苹等. 西北农学报, 19(11) 135-140)相结合的方法。
(2)mir156与spl表达分析:采用半定量pcr的方法鉴定mir156与spl在葡萄果实发育的不同时期以及不同处理与处理对照果实的表达水平。第一步设定:temp 94℃,time 0500,第二步temp 94℃,time 0030,第三步temp 59℃,time 0030,第四步temp 72℃,time 0030,第五步goto 2,25 me times,第六步temp 72℃,time 1000,第七步temp 16℃,time fever,最后pcr产物的检测,验证mir156与spl表达。
4. 研究创新点
创新之处:
(1)研究预期成果上的创新:模式植物拟南芥、水稻的研究表明,spl转录因子家族的多个成员参与植物果实发育的多种生理代谢过程。但是,与拟南芥、水稻果实具有显著不同的葡萄乃至其它果树方面尚未见spl调控果实发育成熟的分子机制的报道。指导老师前期初步研究发现,葡萄spl家族中具有mir156靶点的成员可能参与果实发育成熟过程的分子调控。因此,本实验拟以mir156为切入点,研究mir156介导spl转录因子调控葡萄果实发育成熟的分子机制。本实验的完成有助于从分子水平认识葡萄果实发育成熟的调控机理,也为其它果树果实成熟的分子机制的研究提供重要参考。
(2)研究方法上的创新:本实验拟通过mirna与转录因子的联合分析,采用aba、naa处理,探索mir156介导spl参与的葡萄果实发育成熟过程的生物学通路,阐释它们调控葡萄果实发育成熟的分子机制的研究方法也是本实验的特色与创新之处。
5. 研究计划与进展
研究计划:
2014.05-2016.05:
1) 实验开展的准备工作,主要是购买所需试剂盒、易耗品以及植物实验材料的确认及采集;
课题毕业论文、开题报告、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。