1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1本研究的目的意义
1989年，fields[1]和song提出并创立了一种直接于酵母细胞内检测蛋白质之间相互作用的遗传学新方法一酵母双杂交系统，又称相互作用陷阱。这一技术在细胞周期与分化、细胞凋亡、信号转导、癌基因产物功能、基因表达调控及蛋白自身特性等研究领域[2]受到越来越多的关注。随着该技术的发展和研究的深入，衍生出酵母单杂交[3]、三杂交[4]、反向双杂交[5]等体系。其应用范围扩展至蛋白质与蛋白质、蛋白质与dna、rna及与其它小分子相互作用的研究，其对于新作用蛋白的发现，蛋白间相互作用网络的认识，甚至对整个蛋白质组的研究起到巨大的推动作用。
bbx蛋白是一组锌指转录因子，包含一个或两个b-box基序，有的具有cct结构域。在拟南芥中，b-box家族包含32个蛋白成员[6]。研究表明，拟南芥超表达bbx24（sto）能够促使其在长日照和短日照下均提早开花，而敲除bbx24（sto）仅能够在短日照条件下延迟野生型开花。bbx24除了与开花时间有关外，还与植物的抗性有关[7]。在菊花中，cmbbx24至少具有两个功能：一是调控开花时间和非生物胁迫抗性，二是影响赤霉素的生物合成[8]。
2. 研究的基本内容和问题
1.1研究目标
（1）通过rt-pcr，3'-race和5'-race扩增，克隆基因，得到cmbbx28，cmbbx29的全长；
（2）构建载体pgadt7-cmbbx28、pgadt7-cmbbx29；
3. 研究的方法与方案
2.1研究方法
采用rt-pcr，3'-race和5'-race扩增，测序、拼接和序列比对得到基因cmbbx28和cmbbx29的全长；构建载体pgadt7-cmbbx28和pgadt7-cmbbx29时，采用bioxm软件分析目的基因所含及不含的酶切位点，采用premier6.0软件设计引物，载体构建完成后可利用pcr原理进行测序验证；采用酵母双杂交系统验证cmbbx24与cmbbx28和cmbbx29是否存在互作。
2.2技术路线
4. 研究创新点
3.1研究内容的创新
cmbbx24在菊花中至少具有两个功能：一是调控开花时间和非生物胁迫抗性，二是影响赤霉素的生物合成。本研究以神马菊花为材料，旨在筛选可能与bbx24相互作用的蛋白及验证蛋白间是否存在相互作用，从而为cmbbx24及互作蛋白转基因菊花功能的分析奠定基础。本项目的实施可以推进菊花优异基因资源的发掘，为菊花花期及抗逆新品种的培育，以及分子设计育种提供重要的理论依据。因此，本研究拟开展的bbx24相互作用蛋白的分子遗传研究，研究内容新颖。
3.2研究手段和方法的特色
5. 研究计划与进展
①2015.92015.10熟悉实验室环境，阅读相关文献。
②2015.112016.3通过rt-pcr，3'-race和5'-race扩增，测序、拼接、序列比对得到基因cmbbx28和cmbbx29。
③2016.32016.4构建载体pgadt7-cmbbx28和pgadt7-cmbbx29；再运用酵母双杂交系统验证cmbbx24与cmbbx28和cmbbx29是否存在互作。
