1. 毕业设计（论文）的内容和要求
运用基因重组方法构建ssra单基因缺失突变株。
pcr扩增ssra1-cat-ssra2基因并将其插入转化克隆测序，筛选正确的抗性片段，电转化入已携带温度敏感型质粒pkd46的apec e058中，根据同源重组原理，筛选出ssra突变株e058△ssra::cat。
通过药敏纸片法测定e058 tmrna突变株和e058的耐药性，评价tmrna对于细菌耐药性的影响。
2. 实验内容和要求
内容：1.构建ssra单基因缺失突变株： （1）pcr扩增ssra1-cat-ssra2基因并将其插入转化克隆测序，筛选正确的抗性片段 （2）电转化入已携带温度敏感型质粒pkd46的apec e058中 （3）筛选出ssra突变株e058△ssra::cat2.野生株和突变株耐药性检测通过药敏试验纸片扩散法分别测定apec e058野生株以及上述构建的apec e058 ssra单基因突变株e058△ssra::cat对青霉素等19种抗生素的耐药性，进一步得出ssra基因对于细菌耐药性的影响。
要求：本实验要求熟练掌握pcr，琼脂糖凝胶电泳，碱裂解法提质粒，电转化等分子生物学，微生物学以及基因工程的基本实验操作。
整个实验过程较为复杂，需要实验者能静下心来查阅文献，摸索实验条件，发现并解决实验中遇到的问题。
3. 参考文献
[1] 穆晓惠. λ red重组系统用于apec基因突变株的构建及抗性去除前后对突变株致病作用的影响[d]. 扬州：扬州大学
[2] 宦海霞, 张科. 大肠杆菌致病因子研究进展[j]. 中国家禽, 2010(23):45-48.
[3] komine,y.,kitabatake,m.,yokogawa,t.,etc. a trna-like structure is present in 10sarna, a small stable rna from escherichia coil[j]. proceedings of the national academy of sciences of the united states of america,sep 27,1994,91(20):9223-7
4. 毕业设计（论文）计划
2022年5月：选题开题，收集实验涉及的各种研究方法，准备展开实验。
2022年5月-2022年3月：开展实验，构建apec e058 ssra基因缺失突变株，并通过药敏纸片法对构建成功的ssra突变株e058△ssra::cat以及野生株进行抗生素敏感试验。
2022年4月：完成实验工作，对实验结果进行分析归纳，得出结论，同时进行论文初稿的撰写。
