1. 毕业设计（论文）的内容和要求
在利用里氏木降解纤维素为葡萄糖继而发酵生产液体燃料和大宗化学品的工业生产过程中，降解纤维素到葡萄糖是关键的一步。β-葡萄糖苷酶在调控纤维素酶的酶活及其表达时又起到至关重要的双重作用。研究显示作β-葡萄糖苷酶的转糖基作用在工业生产纤维素酶的主要菌株里氏木霉纤维素酶的诱导表达中起到关键作用，然而其作用机理有待于进一步研究。为了下一步研究β-葡萄糖苷酶Cel1a在里氏木霉RutC-30中对纤维素酶诱导表达的影响，本课题旨在通过克隆使得β-葡萄糖苷酶Cel1a在里氏木霉胞内有效表达。进而建立更完善的里氏木霉产纤维素酶的产酶机制及调控机理。
2. 实验内容和要求
1.目的基因（包含启动子）的获取 1.1里氏木霉基因组dna的提取 1.2设计扩增β-act的启动子和cel1a的引物，然后将目的基因pcr 1.3用引物将启动子pcr 1.4目的基因与启动子的连接片段的pcr2.目的基因（包含启动子）与运载体结合 2.1目的基因（包含启动子）的酶切回收 2.2质粒dna的纯化及酶切回收 2.3利用overlappingpcr将连成一个片段得到pact-cel1a3.将重组子导入受体细胞4用酶切和测序的方法检测重组子及其表达 5.转化 5.1培养好的里氏木霉的孢子及农杆菌的转化5.2农杆菌介导转化真菌孢子
5.3 转化子的筛选及其检测
6.将转化子进行酶活力检测
3. 参考文献
1.乔宇. 里氏木霉纤维素酶基因的克隆和表达的研究[d]. 北京师范大学, 2004.
2.薛宇峰, 吴金玲, 丁悦. 中性纤维素酶β-葡萄糖苷酶基因的克隆表达及酶活测定[j]. 数字技术与应用, 2010(5):173-174.
3.宋娜娜, 宋向阳, 连之娜,等. 纤维素酶液中β-葡萄糖苷酶的分离纯化[j]. 南京林业大学学报:自然科学版, 2011, 35(4):111-116.
4. 毕业设计（论文）计划
1.明确论文任务，搜集资料：9月21日～10月1日2.β-葡萄糖苷酶启动子的克隆：10月1日～10月20日3.β-葡萄糖苷酶cel1a目的基因的克隆:10月20日～11月15日4.启动子与目的基因cel1a的连接片段的克隆:11月15日～11月30日
5.重组子的检测与鉴定：11月31～12月14日6.β-葡萄糖苷酶cel1a导入大肠杆菌及筛选目的菌株12月16日～12月30日7.将目的基因转入农杆菌中：12月31日～1月5日8.里氏木霉与农杆菌的共培养及转化子的筛选：2月20日～3月15日
9.酶活的测定3月15日～4月15号
