开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 拟研究的问题
研究同时测定多种CYP450探针药物的活性代谢产物的LC-MS/MS分析方法，包括离子源的选择，电离方式，DP值以及CE值的选取，消除基质效应等问题。
- 研究目标
CYP450是人体内参与内源性和外源性化合物发生生物转化的重要的代谢酶，参与了大约70%的药物的代谢。所以，利用探针药物测定催化特定底物的CYP450酶的活性可为临床安全合理用药提供科学依据。建立多种种探针药物的LC-MS检测方法，检测时间短，操作简便，方法线性好，日内日间RSD均满足检测分析的要求，拥有良好的精密度，可以应用于CYP450酶的代谢能力研究。
- 文献综述
药物代谢的主要场所是肝脏，肝脏进行生物转化则依赖于微粒体中的多种酶系，其中最重要的是细胞色素p450混合功能氧化酶（简称cyp450）。它于1958年被发现以来,就引起了人们的广泛重视.近年来每年发表的有关CYP450的研究论文已超过2000篇。细胞色素P450(cytochrome,CYP450)是一类以还原态与CO结合后在450nm处具有最高吸收峰的含血红素的单链蛋白质。CYP450 受多种因素的影响，不仅其活性易被诱导或抑制，而且个体间存在明显的遗传学差异,不同的个体代谢酶的活力不同。CYP450的遗传多态性是药物代谢个体差异的主要原因，该种差异会导致药物对机体产生毒副作用或者使其疗效发生明显变化。
细胞色素P450酶系统广泛分布于动物、植物和微生物体内，是自然界中含量最丰富、分布最广泛、底物谱最广的Ⅰ相代谢酶系。CYP450是Ⅰ相代谢酶，可催化多种药物、前毒物、前致癌物等外源性物质氧化和还原代谢和类固醇激素、花生四烯酸等内源性物质的合成和代谢。CYP是一超基因家庭,编码500多种酶蛋白，人体内CYP450酶主要存在于肝脏和小肠中，其中参与药物代谢的主要CYP依次是CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2E1，此外还有CYP1A2、CYP2A6。
据统计大约38个类别共150多种药物是CYP3A4的底物; CYP2D6是迄今为止发现最具有遗传多态性特征的代谢酶; CYP2C9具有遗传多态性,大量研究表明CYP2C9在人类存在几种等位基因突变体,其中最主要的三种等位基因是野生型(CYP2C9*1)、R144C突变体(CYP2C9*2)和I359L突变体(CYP2C9* 3),并已在不同的种族得到证实; CYP2C19主要存在于肝微粒体中,其基因定位于第10q24.1-q24.3,全部序列包括9个外显子和5个内含子。CYP2C19分子由490个氨基酸组成,具有分子多态性; CYP2E1最早于1984年从兔肝微粒体中分离纯化出来,其特征为能被乙醇诱导,并命名为P450 LM3a; 芳胺、杂环胺及一些含卤烃化物均是CYP1A2重要底物,同时也是代谢某些黄嘌呤类药物如丙米嗪、普奈洛尔、氯氮平、茶碱、咖啡因重要同工酶; CYP2A6仅占人类肝CYP 2%,是一个香豆素7-羟化酶,具有基因多态性特征。大量等位基因存在是细胞色素P450引起药物氧化代谢个体差异和种族差异的生化基础。
上述7种与药物代谢有关细胞色素P450酶代谢底物、诱导剂和抑制剂见表1
表1 7种主要CYP450酶代谢底物、抑制剂和诱导剂
体外运用肝CYP450酶技术进行药物代谢研究可以预知候选化合物在体内代谢物,通过对这些代谢物活性和毒性研究,寻找更为安全有效的化合物,大大减少新药开发和研究费用。
