百日咳疫苗PRN组分特异的鼠单克隆抗体制备文献综述

 2022-12-07 04:12

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于1500字)

一、立题背景及研究现状

百日咳是由百日咳杆菌引起的一种严重急性呼吸道传染病,传染性较强,人群普遍易感,其中尤以婴幼儿多见,是严重威胁人类健康的主要传染病之一[1]。百日咳毒素(pertussis toxin, PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin, FHA)和百日咳粘附素(pertactin, Prn)是百日咳杆菌生产过程中产生的生物活性物质, 与百日咳杆菌粘附和定居在宿主呼吸道的上皮细胞、引起患者临床症状有关,是百日咳杆菌致病的重要毒力因子[2]。同时 PT、FHA 和 Prn 还具有较强的免疫原性,能刺激机体免疫系统产生特异的保护性抗体,至今,已被世界上很多国家作为无细胞百日咳疫苗的组成成分[3]。本实验目的是制备百日咳PRN特异性单克隆抗体细胞株。为无细胞百日咳疫苗的质量控制、百日咳诊断和流行病学研究提供物质基础[4]。

目前世界上生产的无细胞百日咳疫苗有20-30种,分别含有不同剂量或者不同种类的抗原[5],主要为五组分疫苗和三组分疫苗两种。其中五组分疫苗含pertussis toxin PT、fil-amentous haemagglutinin FHA、pertactin PRN、agglutinogen Agg2、Agg3;三组分疫苗含PT、FHA、PRN。百日咳黏着素(pertactin,PRN)是所有有毒力的百日咳杆菌产生的一种非纤毛性凝集原,存在于菌体外膜上,属于自主转运蛋白。它能产生保护水平的抗体,已经成为百日咳组分疫苗的重要抗原成分。大量实验证明在单组份(PT)或两组份疫苗(PT,FHA)中加人PRN,可以明显地增加疫苗的保护力[6-7]。

单克隆抗体是重要的研究工具、诊断试剂和临床治疗手段。方法学在抗原制备、免疫策略、高通量筛选和抗体生产等方面的不断发展加速了新型抗体的产生、鉴定和生产。如今,单克隆抗体不仅应用于研究和实验室的诊断,并且已经被用作治疗试剂在多个领域都有广泛的用途,如移植、肿瘤学、感染性疾病和很多其他学科领域。不同的免疫方案和筛选策略可以分离和鉴定出能分泌所需特异性抗体的独特的杂交瘤细胞[8]。因此,杂交瘤细胞技术的发展和抗体的产生,将使单克隆抗体成为在医学领域及工业上都具有巨大应用价值的重要工具[9]。

随着分子免疫学、分子生物学理论和技术的发展,可使用疫苗品种的日益增多,使得儿童的接种次数也显著地增加,给儿童、家长及医护人员带来许多不便,同时也增加了疫苗使用和管理的困难[10-11]。因此,对于新的多价联合疫苗必须通过临床试验在受试者人群接种疫苗后,通过其免疫应答强弱和人体接种的反应性,评估所选择相容性抗原联合和配比的最佳程度,以及其不同疫苗组份的免疫效果是否干扰等来评价联合疫苗的质量[12-14]。因此,特异性强和重复性好的疫苗接种后免疫原性效果评价实的验室检测方法就显得尤为重要[4]。

二、拟解决的问题

制备百日咳疫苗组分Prn蛋白特异性单克隆抗体细胞株。

三、仪器和试剂

实验仪器:JY92-Ⅱ型超声波细胞粉碎机隔音箱(宁波新芝生物技术股份有限公司)、TS-1型摇床(QILINB)、超净台(AIRTECH)、BCH-1360Ⅱ型生物安全柜(北京东联哈尔仪器制造有限公司)、L-500型离心机(湘仪)、MCO-15AC型CO2培养箱(三洋)、TGL-16M型离心机(湘仪)、DH-500AB型电热恒温箱(北京中兴伟业有限公司)、Milli-Q型纯水仪(Millipore)、AR1140型电子天平(奥豪斯公司)、UV1600型分光光度计(MAPADA)、DEM-3型自动洗板机(北京拓普分析仪器有限公司)。

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