- 实验背景
恶性肿瘤是人类之死的主要疾病，目前主要用放化疗和手术治疗，但因肿瘤早期难以发现和晚期治疗效果不佳且毒副作用大，因此研制高效低毒的抗肿瘤中药制剂是医药界的迫切任务。抗肿瘤药物按作用机制可分为6大类：一、抑制核酸（DNA和RNA)生物合成的药物：如氟尿嘧啶、阿糖胞苷、羟基脲、甲氨蝶呤、6-巯嘌呤等。二、直接破坏DNA结构与功能的药物：如烷化剂、铂类制剂和抗肿瘤抗生素等；三、干扰转录过程阻止RNA合成的药物：如放线菌素D、柔红霉素、阿霉素等；四、影响蛋白质合成与功能的药物：如长春碱类、紫杉醇；五、影响激素平衡的药物：如雌激素、雄激素、抗雌激素、肾上腺皮质激素等；六、抗肿瘤辅助治疗药物：如昂丹司琼、亚叶酸钙等。
应用现代科学方法来研究抗肿瘤中药，在我国约始于50年代中期。1958年，冼美生等报告了中成药犀黄丸的抗动物肿瘤作用。1963年，雷海鹏等报告了对358中植物药、中药单方及复方的抗动物肿瘤筛选的结果，观察到白术挥发油、僵蚕酒等对动物肿瘤的生长有一定抑制作用，为我国系统地研究抗癌中药创立了良好的开端。此后，运用体内、体外各种试验方法研究抗癌中药的报告陆续发表，不少研究者把注意力转移到中药生物调节剂方面的研究上，发现了大量具有免疫调节作用的单位中药和复方制剂，其中有些药物的研究以深入到分子药理学的水平。
中草药以其毒副作用较小、药效可靠等优势,成为抗癌新药筛选比较理想的天然产物资源。但由于中药成分复杂、作用机制不明确,大大限制了其在肿瘤治疗方面的开发和利用。高通量筛选是目前药物发现的主流方法,筛选库是其重要的组成部分。与目前常见的组合化合物药物库和药物衍生物药物库相比,天然化合物药库具有数量庞大、结构多样等巨大优势。中药作为筛选样品库更具有应用历史悠久、药效确切等巨大优势。但是,由于化合物分离工作量大,耗时长,目前并没有规模足够大的筛选样品库。因此建立适合高通量筛选的中药样品库,从中发现新的抗癌活性化合物是目前肿瘤药物筛选的新思路。
药物筛选指的是采用适当的方法，对可能作为药物使用的物质(采样)进行生物活性、药理作用及药用价值的评估过程。广义:是针对特定的要求和目的，通过适当的方法和技术，主要的技术有基因组学、蛋白质组学、代谢组学、计算生物学、生物芯片技术、微流控芯片技术等方法，在一定的可选择范围内，进行药物优选的过程。因此，药物筛选包括新药研究过程中的处方筛选，根据特定目的选择符合要求的药物。狭义:筛选专指采用实验技术进行。药物筛选是现代药物开发流程中检验和获取具有特定生理活性化合物的一个步骤，系指通过规范化的实验手段从大量化合物或者新化合物中选择对某一特定作用靶点具有较高活性的化合物的过程。药物筛选的过程从本质上讲就是对化合物进行药理活性实验的过程，随着药物开发技术的发展，对新化合物的生理活性实验从早期的验证性实验，逐渐转变为筛选性实验，即所谓的药物筛选。
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在540 或720nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
- 实验目的和意义
- 学习细胞传代方法，建立细胞系；
- 学习细胞冻存和复苏的方法，掌握长期保存体外培养细胞的技术；
- 学习四唑盐比色试验，检测细胞存活和生长情况。
- 实验内容
（一）细胞传代
（二）细胞冻存
（三）细胞复苏
（四）MTT比色法
- 96孔板中接种细胞
- 培养细胞
- 呈色比色
四、参考文献
