- 实验背景
恶性肿瘤严重危害人类的生命健康，已成为当今疾病致死亡的主要原因之一。目前恶性肿瘤的主要治疗手段有手术治疗、放疗和化疗等。对于被诊断为晚期肿瘤的患者和己经发生转移的患者来说，化疗是一个较好的选择。临床医生通过调节用药剂量可以优化得到最大的疗效和最小的毒性，帮助患者延长生存时间和提高预后生活质量。然而，肿瘤细胞的耐药性的产生导致肿瘤细胞对化疗药物的敏感性下降，大大限制了化疗的治疗的效果。
肿瘤的多药耐药(Multiple Drug Resistance, MDR)是指肿瘤细胞对某种药物产生耐药性之后,会对从未接触过的、结构不同、作用机制各异的多种化疗药物产生交叉耐药的现象。肿瘤的多药耐药是当前肿瘤治疗的所面临的重大难题之一。为了克服肿瘤细胞对化疗药物的MDR特性,研究者们一直在寻找有效的MDR抑制剂,这些化合物也被称为MDR的调节剂、逆转剂或者化疗增敏剂。近年来,研究发现多种天然产物具有逆转肿瘤细胞MDR的作用。由于天然产物本身对细胞毒性较小,具有良好的安全性,因此,从天然产物中筛选高效低毒的MDR逆转剂日益被医学界所重视并逐渐成为研究的热点。[1]
ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transporters)是一类多次跨膜的转运蛋白家族，能够利用水解ATP提供的能量将药物等分子泵出细胞外。研究表明ABC转运蛋白的高表达是肿瘤产生MDR的主要原因之一[2]。
为了克服肿瘤细胞对化疗药物的MDR特性，研究者们一直在寻找有效的ABC转运蛋白的抑制剂，这些化合物又被称为MDR的抑制剂、调节剂、逆转剂或者化疗增敏剂，它们通常能够调节多个ABC转运蛋白的功能[2]。随着研究的不断进行，新的MDR逆转剂的不断被发现和研究，但较高的细胞毒性一直是困扰MDR抑制剂研究开发的一大问题。因此，开发毒性较小、逆转作用更强的MDR抑制剂或逆转剂仍然是肿瘤药物研究的热点之一。[1]
- 实验目的和意义
在新一代MDR抑制剂的研究过程中，从天然产物中筛选高效低毒的MDR逆转剂日益被医学界所重视并逐渐成为研究的热点。多种天然产物被发现具有逆转肿瘤细胞MDR的作用。如：葡萄籽中的葡萄籽多酚、粉防己中的粉防己碱、茶叶的提取物茶多酚、川芎的成分川芎嗪，丹皮的活性成分丹皮酚，冬凌草中的冬凌草甲素、人参皂普、三七总皂普等多种天然成分都被证实具有逆转肿瘤细胞多药耐药的作用[3]。由于天然产物本身对细胞毒性较低，具有较好的安全性，有望成为MDR抑制剂开发的一个重要来源。因此，在本研究中我们拟定利用人乳腺癌多药耐药细胞株和MCF-7/ADR作为体外筛选模型，拟重点研究罗汉果皂苷元罗汉果醇( Mogrol )对肿瘤多药耐药的逆转作用及其可能的内在机制。
罗汉果(Siraitia grosvenorii Swingle)是葫芦科多年生草本植物，是我国特有的植物，主要产于广西永福、临桂和龙胜等地。罗汉果的果实)可以食用，也可以入药，在广西民间的药用历史己有300多年。罗汉果性凉，味甘，有清热润肺，滑肠通便的功效[[40]。罗汉果因其甜度高、热量低而被作为甜味剂广泛使用，常作为肥胖者和糖尿病患者的代用糖。罗汉果的主要化学成分之一是罗汉果皂苷，该类化学成分具有镇咳、祛痰、平喘、调节免疫、降低血糖、抗病毒和抑制肿瘤细胞增殖等药理作用[[41-4习。在罗汉果总皂苷中，罗汉果皂苷IA1,IE1, IIE, III, IV, IVE, V和赛门苷I等均以罗汉果醇( Mogro 1)为苷元。[4]
三、实验内容[5]
1、细胞复苏
2、细胞传代
3、细胞冻存
4. CCK一8法检测化合物抑制肿瘤细胞生存
