开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
课题背景：
哮喘是由免疫球蛋白E(immunoglobulin E, IgE)抗体介导的超敏反应性疾病，免疫球蛋白 E (IgE) 在支气管哮喘发病中起关键作用。奥马珠单抗(omalizumab) 是一种重组人源化IgE单克隆抗体,通过与游离IgE结合而显著降低游离IgE 的水平,阻断 IgE与肥大细胞嗜碱粒细胞结合,防止炎症介质的释。奥马单抗不但能够显著改善哮喘病人的症状、肺功能及生活质量,减少哮喘恶化的发作次数,减少糖皮质激素的用量,而且使用安全, 奥马珠单抗的疗效已得到临床试验的证实,且其耐受性良好，因此是一种前景广阔的治疗支气管哮喘的新。
奥马珠单抗(omalizumab)是由抗 IgE mAb 通过杂交瘤技术制备。用人 IgE 免疫小鼠，然后自小鼠脾脏分离 B 淋巴细胞并使之与骨髓瘤细胞融合，产生“杂交瘤”细。该杂交瘤细胞具有持续分泌抗 IgE mAb 的性质。这种抗 IgE mAb 能与游离 IgE结合，由此阻断 IgE 与 FcεR Ⅰ的相互作用、进而阻止肥大细胞和嗜碱性粒细胞的脱颗粒。因为鼠抗 IgE mAb 用于人易引起过敏反应，所以将抗原性的鼠抗 IgE mAb 的恒定区去除而只保留与 IgE 特异性结合的互补决定区，然后将其插入人 IgG1 的结构框架中、形成人源化的抗IgE mAb 即奥马珠单抗。研究发现，奥马珠单抗能降低过敏原诱导的动物模型的速发相和迟发相超敏反。
目前，生物技术类药物包括抗体、重组蛋白、核酸、多肽等药物是发展迅速及产业前景看好的医药产业。2010年全球生物药销售额达到1400亿美元,占全球药品市场的16%,其中有一半来自抗体产业的贡献，其中单克隆抗体由于良好的靶向性，耐受性，是生物技术当中的核心技。近十年来随着抗体药物需求量的不断增加,以及越来越多的新产品进入临床研究,取得了前所未有的发展。动物细胞培养技术直接影响生物技术药物的发展，如何快速高效地建立细胞生长高密度、产物表达高质高产的动物细胞培养过程及其产品生产工艺,不仅是各国大力发展单克隆抗体、重组蛋白质药物等生物技术制药产业的一项重要任务,而且也已成为国际生物医药产业创新和发展的核心竞争力。因此,研究动物细胞培养过程开发和优化的关键技术，建立抗体、重组蛋白质药物等生物医药产品的高效生产工艺,对企业发展有着重要的意义。
本课题将从以下五个部分，从细胞株筛选开始，摸索出一种适合在工业反应器中进行细胞培养的稳定工艺，生产出质量稳定可靠可用于临床的单克隆抗体。
实验流程：
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构建细胞株的评价
- 细胞复苏
从液氮容器中取出冻存细胞，共8株，37℃水浴融化后，分别加入到含有5ml SFM4CHO培养基的无菌离心管中，1000rpm，5min离心，分别用15ml新鲜培养液重悬细胞，每株细胞均加入MTX浓度至50nmol/L。置于方瓶，37℃，5% 孵箱培养。超滤过程参数的确定
1.2 细胞状态恢复培养
待复苏后的种子生长到达一定密度后，按8times;105cells/ml接种至100ml摇瓶中，20ml体积，37℃，130rpm，5%CO2摇床培养。连续进行传代培养，MTX逐步增加至200nmol/L，直至细胞密度与活率都上升到符合接种要求（密度达到2.0times;106cells/ml、活率至95%），且在倒置显微镜中观察细胞形态较为均一、 折光率强即可用于实验。
