开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 研究背景及意义
氯吡格雷是一种广泛使用的抗血小板药物，能够选择性地抑制二磷酸腺苷（ADP）与血小板受体的结合及抑制ADP介导的糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物的活化，从而抑制血小板聚集[1]。氯吡格雷可以大幅度降低心血管事件的风险[2,3,4]，常用于治疗心肌梗死、脑卒中和心脑血管疾病等[5]。
氯吡格雷是一个本身没有活性的前体药物，主要在肝脏代谢，大约有85%的原型药物被血液中的羧酸酯酶水解为没有活性的羧酸代谢物（Clopidogrel Related Compound A,CRCA）[6]，约15%的原型药物在细胞色素P450酶系（主要是CYP3A4、CYP2B6、CYP2C19等）的氧化作用下形成2-氧基-氯吡格雷（2-oxo- Clopidogrel），再经过水解作用最终形成具有活性的硫醇衍生物[7,8]。
目前，关于氯吡格雷的疗效存在明显个体差异性的报道越来越多[9-10]，因此，建立快速、灵敏、准确的人体血浆中氯吡格雷的含量测定方法对指导其在临床上的血药浓度监测和制定合理的个体化给药方案具有重要意义。
- 研究进展
氯吡格雷的体内过程较复杂，不同的研究对象其研究意义也不同，定量氯吡格雷原型药物适用于生物等效性研究，定量氯吡格雷及其活性代谢物适用于药代动力学研究，定量非活性羧酸代谢物可以考察氯吡格雷在体内的转化情况。
目前，国内外文献主要报道了氯吡格雷及其非活性羧酸代谢物的测定方法[11-12]，以应用于氯吡格雷的药代动力学研究。氯吡格雷的活性硫醇代谢物含有巯基，在血浆中不稳定，极易降解，检测存在较大难度[13]，因此文献中大多通过衍生化的方式保护巯基[14,15]，采用液-质联用的方法测定其血药浓度。Takahashi等[14]报道了一种使氯吡格雷活性代谢物稳定的衍生化方法，即将活性代谢物与2-溴-3rsquo;-甲氧基苯乙酮（MPB）反应，生成稳定的衍生物，这一反应的衍生化效率大于90%，并且相当稳定，适合于氯吡格雷的药动学研究。
氯吡格雷的原型药物在血浆中的浓度极低，达到ng/ml级，采用普通的检测手段无法满足测定要求，同时，欧洲药品评价局（EMEA）指出进行氯吡格雷血药浓度测定时存在氯吡格雷羧酸代谢物重新转化为氯吡格雷，使得样品再分析（ISR）时出现氯吡格雷血药浓度升高的现象[16]，因此，采用液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）检测人体血浆中氯吡格雷的含量，并考察生物样品在测定过程中的稳定性，避免羧酸代谢物回转为氯吡格雷是本课题着重解决的问题。
- 研究手段
目前，液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）已经广泛应用于药物的药代动力学和生物等效性研究。LC-MS/MS法结合了色谱法和质谱法的优点，即色谱法的分离能力和质谱法的鉴别能力，提高了对样品分析的灵敏度及选择性，并能提供化合物的相对分子量和结构信息。在药物的定量研究中，常用的质谱仪为串联四级杆质谱仪，常用的离子源为大气压化学离子源。常用的生物样品有全血、血浆、尿液、粪便、组织等，通过蛋白沉淀、液液萃取、固相萃取等方法对其预处理后再进行分析和测定。
本实验拟采用Waters公司ACQUITY I Class system液相色谱系统和AB SCIEX 公司TRIPLE QUARD 6500三重四级杆串联质谱，通过对样品预处理条件，色谱条件及质谱条件等方面的优化，建立简便、快速、灵敏度高、专属性好的液相色谱-串联质谱方法测定人体血浆中氯吡格雷的浓度，以期应用于药物的药代动力学研究中。
- 实验方案及进程安排
具体研究内容如下：建立测定人体血浆中氯吡格雷的液相色谱-串联质谱分析方法，旨在提高该方法的选择性、准确度、灵敏度，避免氯吡格雷羧酸代谢物转化为氯吡格雷的情况，对分析方法进行确证，并应用于药代动力学研究中。
