开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题背景
非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 是非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）在发展过程中的一种伴随着炎症及肝细胞脂肪变性的疾病表现。流行病学统计显示，过去的20年里NAFLD 发病数已经翻倍。在美国，NAFLD患者中的10-30%会发展为NASH。预计在2020年，NASH将成为美国肝脏移植的做主要原因。在中国，部分地区的非酒精性脂肪肝炎流行率高达27%。NASH危害极大，发病后期很可能转化为肝硬化，肝癌。
近年来对NASH的疾病研究有了很大的突破，其疾病的分子机制可能与脂联素，瘦素，脂肪酸结合蛋白 （fatty-acid binding protein， FABP）过氧化物酶增殖活化受体gamma;（peroxisome proliferative acti-vated receptor-gamma;， PPAR-gamma;）等的异常表达相关，但具体的疾病发生机制还存在很大争议。目前普遍接受的发病机制为“二次打击学说”。该学说认为，由于胰岛素抵抗（IR）导致肝脏细胞内脂质代谢异常，脂质的合成转运发生障碍并堆积在肝实质细胞内，从而引起肝内脂肪堆积，即单纯性脂肪肝，这就是“第一次打击”。由于脂质的过氧化损伤，产生氧化应激，并伴有异常细胞因子的作用，这就是“第二次打击”，进而发展为肝炎，肝纤维化。“二次打击”主要涉及肝细胞氧化应激、脂质过氧化、丙二醛等脂质过氧化物增多，该类物质能导致肝细胞酶活性及线粒体功能受损。细胞因子等的参与能诱发非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化。其他如激素、环境、遗传、免疫反应、内毒素血症、缺氧和肝微循环障碍等也都参与了的形成，表明该病具有多因素、多环节的发病特点。并且，目前尚未有FDA批准的药物用于NASH的临床治疗。开发治疗NASH的药物迫在眉睫。
目前，国内外用于科学研究的NAFLD动物模型主要包括3类: 一类为基因敲除或基因突变模型; 一类为营养、药物或毒物诱发模型; 另一类则为复合模型(联合应用基因模型和营养模型)。三类模型的主要原理均集中在肝内脂肪酸摄入、合成、酯化与氧化分解、输出的不平衡上。基因敲出及突变的特殊品系动物模型因基因突变或缺失,引起脂肪酸代谢障碍, 能自发形成脂肪肝, 且伴肥胖、胰岛素抵抗等代谢综合征相关组分, 但多缺乏NASH和肝纤维化的自然演变过程, 仅适NAFLD特定发病机制的研究，且造价昂贵；HFD高脂饲料诱导的NASH模型在发病机制上与人类NASH最相似, 且多合并肥胖、胰岛素抵抗及其他代谢综合征的组分。但其成型时间较长, NASH及纤维化程度还取决于动物品系、饮食中脂肪所占比例及诱导时间长短；药物或毒物诱导模型具有成型时间短、方法简便、病变明显等特点, 但其最大缺陷是未出现肥胖和胰岛素抵抗, 这与人类NAFLD的病理生理特点差异较大, 且动物肝损伤严重, 死亡率高。
MCD饮食诱导是一种国际上经典的NASH模型，小鼠饮食缺乏胆碱导致卵磷脂合成不足，缺乏蛋氨酸导致载脂蛋白合成不足，从而低密度脂蛋白胆固醇减少，甘油三脂无法转运出肝细胞，形成肝细胞脂肪样性变。该模型造模快速，因而常被用于开发NASH药物评的筛选评价[1] 。且有文献表明 C57BL-6小鼠炎症坏死最明显, 雄性鼠对营养性肝损伤易感性更高[2]。经MCD 饮食诱导的小鼠，2w 即可形成 NASH，肝脏组织内可见炎性细胞浸润，并伴有相关炎性细胞因子表达增加，与其他模型相比氧化应激和线粒体 DNA 的损伤更加明显[5-7]。因此，我们将才用胆碱-蛋氨酸缺乏（MCD）饮食诱导的C57BL/6J雄性小鼠非酒精性脂肪性肝炎模型对目前可能存在治疗非酒精性脂肪性肝炎作用的天然产物X进行评价。
- 要解决的问题
本项目旨在通过构建体内NASH疾病模型，评价天然产物X的治疗活性，为今后天然产物X的活性研究打下基础。
- 研究方法和内容
1.实验对象：清洁级B57CL-6雄性小鼠，20plusmn;2g。
2.动物饲料：MC D 及蛋氨酸胆碱添加（methionine- choline- supplemented, MCS）饲料，饲料储存于4℃冰箱。
3.实验仪器：离心机，全自动生化分析仪器，石蜡切片机，光学显微镜，WB仪器，电子天平，匀浆机。
