开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一、拟研究的问题

乳腺癌(breast cancer BC)是最常见的癌症之一，大约占女性的30%。女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，其中乳腺上皮组织的是乳腺癌发生的一个主要场所。BC中99%发生在女性，男性仅占1%。约占新女性癌症病例的30%。其治疗方案主要包括手术结合放化疗、激素治疗及靶向治疗。然而BC患者的死亡率仍然很高。越来越多的研究表明，乳腺癌细胞中存在一部分具有自我更新、多向分化潜能以及高度致瘤能力的细胞亚群，称为乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells BCSC)。由于乳腺癌干细胞与肿瘤的侵袭转移、复发和耐药性密切相关，故已成为目前研究的热点和难点^[2]。越来越多的研究表明CSC可以引发肿瘤细胞的增值、自我更新、迁移、侵袭以及原发性肿瘤的异质性，许多化疗药物的组合治疗乳腺癌干细胞（BCSC）不仅增加了BCSC中标志物的表达，而且还促进了CSC依赖性非干细胞向CSC的转化 。因此，以BCSC为靶点的策略势必为治疗BC提供新的思路。本课题主要探究HET0016是否可以削弱BC细胞的干性，从而抑制肿瘤细胞的增值、迁移、侵袭。

二、实验主要内容:

本实验的研究包括以下几项内容:

（1）通过MTT法检测HET0016对乳腺癌细胞活性的影响；

（2）通过实时荧光定量PCR以及western blot检测HET0016乳腺癌细胞中肿瘤干细胞标志分子的表达的影响；

（3）通过干细胞成球实验检测HET0016乳腺癌细胞成球能力的影响；

（4）通过流式细胞术检测HET0016乳腺癌细胞中CD44 /CD24-干性细胞群比例的影响。

三、实验方法:

1、通过MTT法检测HET0016对乳腺癌细胞活性的影响；

接种细胞：收集对数期细胞，每孔细胞调密度1000-2000个/孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。72h加入一定浓度的HET0016，5%CO2，37℃孵育72h。每孔加入20ulMTT溶液终浓度为5mg/ml，即0.5%MTT，继续培养4h。用PBS冲2-3遍，再加入含MTT的培养液。终止培养，吸去孔内培养液。每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。在酶标仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标, 吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线[3]。

2、通过实时荧光定量PCR检测HET0016对BCSC标志分子的表达的影响；