一．选题目的及意义
临床上致病菌的感染十分常见，发病率和死亡率高,如果得不到早期快速的诊断和治疗,会严重危及患者的生命健康。但是传统致病菌的培养方法以及酶联免疫法，显微镜检法，PCR诊断技术等检测方法，往往耗时长，或需要特殊设备和专业操作,缺乏敏感性和特异性,不能早期快速的诊断病原菌感染,因此,寻找快速的诊断方法至关重要。
环介导等温扩增（loop mediated isothermal amplification，LAMP）,是一种恒温核酸扩增方法，能在等温（60-65℃）条件下，短时间（通常是一小时内）内进行核酸扩增，效率可达109～1010倍。与常规PCR相比，不需要模板的热变性，温度循环及紫外观察等过程。环介导等温扩增法是一种全新的核酸扩增方法，具有简单、快速、特异性强的特点。不依赖任何专门的仪器设备实现现场高通量快速检测，检测成本远低于荧光定量PCR。LAMP法的特征是针对靶基因上的六个区域设计四条引物（包含内引物BIP、外引物FIP），利用链置换活性的BstDNA聚合酶在恒温条件下进行扩增反应，产生大量的扩增产物即焦磷酸镁白色沉淀，结果检测非常简单，直接肉眼观察白色沉淀或者用显色剂直接显色即可，也可用琼脂糖凝胶电泳。
本实验尝试通过分子生物学方法环介导等温扩增做到对于临床常见致病菌的快速，灵敏的检测诊断。
二．本课题主要研究内容（提纲）
1.环介导恒温扩增体系的建立；
2.环介导恒温扩增反应条件的优化；
3.钙黄绿素显色剂的配比及应用；
4.对用pH值检测环介导等温扩增体系结果的方法研究；
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