一、选题背景
远志为远志科远志属植物远志Polygalae tenuifolia Willd.的干燥根,始载于《神农本草经》,其被列为上品,为养命之药。其性温、味苦、辛,并具有益智安神、交通心肾、消肿、祛痰的功效,同时用于心肾不交所引起的失眠多梦、惊悸健忘、神智恍惚、疮疡肿毒、咳痰不爽、乳房肿痛。远志主要含有皂苷、寡糖脂、呫吨酮、多糖和生物碱等成分,在这些成分中,远志皂苷类成分是益智安神、抗痴呆以及祛痰的主要活性成分。
细叶远志皂苷,全称远志皂苷元—3—0—beta;—D—吡喃葡萄糖苷,英文名为Tenuifolin,是一类五环三萜类化合物,为远志总皂苷的碱水解物,从2010版《中国药典》开始作为中药化学对照品用于远志药材的质量评价。细叶远志皂苷是通过对远志的提取以及水解所得到的成分,通过不同的方法提取,研究对于细叶远志皂苷得到的数量的多少以及其纯度的高低[1]。
通过查阅文献,王玲丽[2]等人采用精密称取远志根皮粉1g,加入70%甲醇20ml,密塞后,超声震荡40min,超声提取2次,合并提取液。蒸干,加入10%氢氧化钠100ml,加热回流2h,放冷后盐酸调节pH4-5,用水饱和正丁醇震荡提取3次/50ml,合并正丁醇液,回收溶剂至干,再加入甲醇溶解,过滤于25ml容量瓶中定容至刻度,用0.45mu;m微孔滤膜过,即得含有细叶远志皂苷的溶液。
董晓兵等[3]采用称取远志根5g,加入8倍量70%乙醇浸泡过夜,回流提取2h,再分别用6倍量的70%乙醇回流提取2次,滤过,合并提取液,回收乙醇,得到浸膏0.75kg。在浸膏中加入1000ml蒸馏水溶解,置D101大孔树脂柱上,用蒸馏水洗至流出液无色后,大孔树脂柱再用3倍量的柱床体积40%的乙醇进行洗脱,再收集洗脱液,蒸干。大孔树脂再用3倍量的柱床体积的70%的乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,蒸干,得到远志总皂苷。取100g的远志皂苷,加入1200ml的5%氢氧化钠溶液回流提取2个小时,放冷后浓盐酸调节pH至4-5。加入乙酸乙酯萃取3次,回收溶剂并得到萃取物。水层用水饱和正丁醇溶液萃取6次,对萃取液进行合并,减压回收溶剂至干,得到萃取物。正丁醇萃取物经过硅胶柱层析,以乙酸乙酯:乙醇:水(10:2:1)洗脱,共得55个流分。合并其中30流分,重结晶得到白色针晶状结晶,即为细叶远志皂苷。
金姝娜 [4]采用取远志5.0g,用10倍量的EtOH渗漉提取,减压浓缩。过大孔树脂,分别使用水、30%乙醇、70%的乙醇进行梯度洗脱,获得各洗脱部分。将70%的乙醇洗脱部分,加入丙酮溶解过滤,收集滤渣,即为皂苷部分。取所得的远志总皂苷30g分为两半,其中一半皂苷加入浓盐酸成为3%-4%的酸溶液,在110℃下水解1h,,收集滤渣,重量为5.4g;另一半的皂苷加入1%的NaOH,室温静置24h,离心,收集滤渣,重量约为4g。滤渣分别是完全水解皂苷元和部分水解的皂苷的粗品。再将酸水解皂苷粗品用甲醇进行重结晶,碱水解皂苷用氯仿进行萃取,除杂,甲醇重结晶,得到皂苷元的结晶粗品和半水解的皂苷结晶粗品。
分别取远志皂苷酸水解的皂苷元以及碱水解的粗品,均称重3g,酸水解的加入150ml的氯仿,碱水解的加入150ml的甲醇,反复超声溶解。酸水解的粗品用8g硅胶拌样至干燥,均匀混合,60℃烘24h,加入100g硅胶柱的上端,进行柱色谱的分离,再用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱,收集1-120号的流分。使用薄层色谱进行检测,合并相似的流分,得到组分A-E。组分B经硅胶柱色谱分离,用氯仿-甲醇梯度洗脱,得到黄色针状物,经高效液相测定,其中并不含有细叶远志皂苷的成分。
碱水解粗品用8g的硅胶拌样至干燥,均匀混合后,60℃下烘24h,加入到100g硅胶柱的上端,进行柱色谱的分离,用氯仿-甲醇进行梯度洗脱,共得到72个流分。经薄层色谱的检识后,合并相似的流分,得到四个组分F-I。其中组分G经过硅胶柱的色谱分离,甲醇的反复重结晶下得到化合物三,使用高效液相测定,其成分即为细叶远志皂苷。
李震宇等 [5]采用将干燥的远志粉碎,加入5-10倍量的70%乙醇溶液回流提取,过滤浓缩提取液,得到浸膏;将浸膏加入1-5倍量的石油醚超声或搅拌提取3次,每次1.5-4小时,静置分层后,取其下层挥干试剂,得到干粉;干粉加入20-300倍量的10%的氢氧化钠溶液,加热回流1.5-4小时,冷却后加入浓硫酸调节pH至4-5,静置,析出沉淀过滤,干燥滤渣,得到干粉;干粉过硅胶柱,以乙酸乙酯:甲醇:水:=20:15:1体积比的混合液洗脱,使用薄层检测,合并含细叶远志皂苷的部分,进行浓缩,得到洗液远在皂苷的粗品;对粗品进行重结晶,得到的白色结晶即为高纯度的细叶远志皂苷。本方法操作步骤简单,所用的有机材料及化学试剂较少,对环境的污染较小,所得到的细叶远志皂苷的成本较低,纯度高,所得产物经高效液相色谱法检测其纯度,可达98%以上,可作为化学对照品用来控制有关远志药材及其制剂的质量。
苏刘花[6]采用酶水解或碱水解远志提取细叶远志皂苷,使远志皂苷转化为次级皂苷细叶远志皂苷,使细叶远志皂苷的收率和纯度都大幅度提高,其工艺过程简单、易于实现工业化生产。取远志药材粉碎,先进行水解,再将水解液加醇溶液回流提取,在提取液中加入活性炭脱色,浓缩脱色液,用丙酮沉淀,再离心,将离心物上聚酰胺柱层析,对醇水溶液洗脱,洗脱液回收溶剂,再进行重结晶,获得细叶远志皂苷。取远志先加水提取2-3次,每次加入的水量为药材重量的6-10倍,把水提液(NaOH水溶液)减压浓缩至稠浸膏,调节溶液至pH4-6,再加入0.1%-0.5%的酶,在25-40℃的条件下反应20-60min,得到远志水解液;将水解液加入乙醇回流提取,得到提取液;将提取液加入3%-10%的药用活性炭进行搅拌脱色,滤除活性炭,得到脱色液;将脱色液浓缩到原体积的1/5量,加入丙酮进行沉淀,离心,得到离心物;将离心沉淀物上聚酰胺柱,先用水和20%的乙醇洗脱,再用40-80%的乙醇洗脱,并收集洗脱液,减压回收试剂,浓缩析出晶体,得到粗品;将粗品用甲醇溶液重结晶,滤出晶体,真空干燥即得到细叶远志皂苷。
