开题报告内容：
纳米脂质载体（NLC），是继传统的乳剂、脂质体、聚合物微粒后今年来研究比较活跃的一种缓控释靶向胶粒给药系统。它是由甘油三酯、复合甘油酯以及蜡类等天然或合成的脂质材料制备，粒径在50-1000nm之间。与传统的乳剂、脂质体、聚合物微粒相比，NLC在室温下通常呈固态，具有聚合物纳米粒物理稳定性高、药物泄漏少的优势，又兼有脂质体和乳剂口服生物利用度高、毒性低、能大规模生产的优点，其脂质材料骨架可保护药物免受胃肠道的降解，调节药物的释放曲线，是一种极具潜力的新型给药系统。然而，制备一种有效的口服药物载体也面临着一个极大的挑战，那便是如何克服由上皮细胞以及黏膜层组成的胃肠道黏膜吸收屏障。药物以口服方式给药后，容易被高度黏弹性、附着性的黏膜层清除，这些因素使药物跨过胃肠道上皮细胞层的量有不同程度的降低。为克服这一缺点，可对粒子进行表面修饰。研究表明，用低分子量的PEG对载体进行修饰后,可以使载体具有以下功能:(a)空间上增强粒子的稳定性,阻止粒子与血浆蛋白的结合,进而降低网状内皮系统的清除速率,延长药物的半衰期;(b)降低免疫原性;(C)增强药物的渗透性及滞留效应。近年来国内外研究者采用引入亲水性成分，以PEG修饰纳米粒，改善药物在体内的稳定性，更好地控制药物释放，延长体内循环时间
本课题主要通过薄膜分散法来制备纳米脂质载体，相对于高温乳化-低温固化法对纳米脂质载体中的磷脂造成的高温破坏，乙醇注入法中的有机试剂较多残留和高压匀质法对纳米载体的量需求多的不足，薄膜分散法可以用于实验室小型化研究，防止磷脂氧化并且通过真空泵作用除去有机试剂，越来越受到研究者关注。本课题的处方中包括双亲性材料口服大豆磷脂，固体脂质三月桂酸甘油酯，液态脂质Labrafac CC，通过加入不同链长的硬脂酸聚氢氧酯（包括S100，S55，S40）。以香豆素-6为荧光标记染料，乙醇和二氯甲烷为有机溶剂，PBS为水合介质通过控制超声时间和超声强度，得到表面不同链长的纳米脂质载体。（处方量：磷脂：262.5mg 三月桂酸甘油酯：21.875mg Labrafac cc：65.625mg 香豆素(100mu;g/ml）：1ml PEG：70mg）
通过ZetaPALS型高分辨率电位分析仪及粒度分析仪考察制剂的粒径，多分散系数PI以及粒径表面的电位。通过微孔滤膜过滤法,荧光检测器测定香豆素-6的包封率；采用动态透析法研究纳米脂质载体在等渗PBS溶液中的体外释放行为。
目前纳米制剂多是通过经由细胞内吞的作用进入细胞释药或被细胞摄取后再转运至另一侧。纳米制剂本身的材料特性、粒径、 zeta 电位、表面修饰配体特性等都能显著的改变纳米粒的内吞或转运作用。目前关于纳米制剂的内吞做作用主要包括吞噬作用、网格蛋白介导的内吞作用、小窝蛋白介导的内吞作用以及巨胞饮作用。同时纳米制剂的内吞还与不同的细胞密切相关。本实验通过制备一系列表面不同PEG链长修饰差异化的纳米脂质载体，考察PEG链长对纳米脂质载体细胞摄取的影响。
Caco-2细胞系来源于人体结肠腺癌细胞，在一定的培养条件下可自发进行上皮样分化并可形成紧密连接，且表面存在大量的细胞微绒毛结构，其形态学、标志酶的功能表达、转运系统的形成以及渗透特征均与小肠上皮细胞类似，因而作为药物在体小肠吸收的一种有效预测工具，被广泛应用于药物结构与吸收的关系、药物及制剂对粘膜毒性的评价、肠腔内pH值对吸收的影响、药物作用等多方面的研究。Caco-2细胞具有三个限制吸收的因素，即不流动水层、细胞间各种连接处(如紧密连接处)和细胞膜，类似于胃肠道的生理屏障作用，因此，Caco-2细胞能在一定程度上反映出NLC等微粒给药系统的在体肠道吸收情况。在细胞实验中，拟采用caco-2细胞作为模型细胞，考察空白纳米脂质载体和载香豆素-6的纳米脂质载体的细胞毒性，确定细胞实验香豆素-6的浓度大小，采用不同的吸收抑制剂，考察不同粒径的脂质纳米粒载体在吸收途径上是否具有显著性不同。通过流式细胞仪考察细胞对制剂摄取随时间和浓度的影响，在此基础上采用transwell半透膜考察不同粒径的NLC在跨膜专用上的差异性。
参考文献
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2、舒乐新，孙精通 ,刘志东，赵启铎.PEG 修饰黄芩苷固体脂质纳米粒的制备.时珍国医国药.2012, 23(10 ):2550-2552.
3、Ying-Ying Wang,Samuel K.Lai,Jung Soo Suk.Addressing the PEG Mucoadhesivity Paradox to Engineer Nanoparticles that“Slip”through the Human Mucus Barrier.Angewandte
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