用凝胶酶谱法检测肺纤维化造模动物肺组织基质金属蛋白酶-2和-9的表达情况文献综述

一、课题研究背景特发性肺纤维化是一种病因不明的特别严重的肺纤维化，诊断后患者的中位生存期仅为3到5年，死亡率极高。

目前针对特发性肺纤维化的上市药物有吡非尼酮（一种抗纤维化和抗炎的药物）和尼达尼布（一种酪氨酸激酶抑制剂），其可以减少用力肺活量的下降，但是这两种药物只能延缓PF的进展，不能逆转纤维化过程，因此需要开发具有针对性的治疗肺纤维化的药物。

多肽P2是本实验室自主设计研发的、由22个氨基酸组成的多肽，前期动物实验发现多肽P2可有效提高造模大鼠的生存率。

本课题拟采用两步法RT-qPCR检测肺纤维化大鼠模型差异表达的基因。

二、课题拟研究或解决的问题前期动物实验发现多肽P2可有效提高造模大鼠的生存率，本课题拟采用两步法RT-qPCR检测肺纤维化大鼠模型差异表达的基因，进而探究多肽P2治疗肺纤维化的机制。

三、课题拟采用的研究手段本课题采用qPCR的方法检测肺纤维化大鼠模型差异表达的基因，其步骤如下：1.大鼠肺组织RNA提取2.逆转录（1）残留基因组DNA去除在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。

42℃ 孵育2min。

组分 使用量RNase free ddH2O To 15mu;l5gDNA digester Mix 3mu;lTotal RNA 10pg-5mu;gor mRNA 10pg-500ng（2）逆转录反应体系配制：在（1）的反应管中直接加入4HifairⅢ SuperMix plus，用移液器轻轻吹打混匀（3）逆转录程序设置：25℃ ，5min；55℃ ，15min；85℃ ，5min3.qPCR（1）反应体系组分 体积 体积 终浓度Hieff UNICON Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix 25 10 1Forward Primer (10mu;M) 1 0.4 0.2mu;MReverse Primer (10mu;M) 1 0.4 0.2mu;M模版DNA X X -无菌超纯水 to 50 to 20 - a)引物浓度：通常引物终浓度为0.2mu;M,也可以根据情况在0.1-1.0mu;M之间进行调整。

b)模板浓度：如模板为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。